IFN-γ---T细胞的检测

niwanmao

以梦为x马 发表于 2015-8-7 20:06
选择左边和右边差别很大，而且单独选择左边这群，CD4阴性的淋巴细胞比例很低，感觉很不对
...

没用CD3设门吗？

以梦为x马

niwanmao 发表于 2015-8-7 21:55
没用CD3设门吗？

老师终于出现了啊没有CD3设门，主要问题是淋巴细胞不同大小，不知选哪群？CD4是CD3的一个亚群

niwanmao

以梦为x马 发表于 2015-8-7 22:12
老师终于出现了啊没有CD3设门，主要问题是淋巴细胞不同大小，不知选哪群？CD4是CD3的一个亚群 ...

我的意思是如果用CD3设门，那么你这个因为大小不同想不好设门的问题就解决了。

以梦为x马

niwanmao 发表于 2015-8-8 06:51
我的意思是如果用CD3设门，那么你这个因为大小不同想不好设门的问题就解决了。 ...

老师您的意思是，FSC-SCC这两群都圈起来，然后再把CD3+圈起来---代表淋巴细胞，再把CD4+圈起来，我也有想过，但是我这两群细胞CD4+都是阳性的，也就是标了CD3他们也都会阳性。现在主要问题是这两群CD4+T比例差别很大，只圈前面那群，CD4+的细胞很高，阴性的细胞太低，感觉都不像；只圈后面那群细胞CD4阳性的细胞比例比较正常。所以到底怎么圈非常困惑

以梦为x马

如果要测Th1、Th17这种胞内因子大家都是用什么破膜剂的啊？

niwanmao

以梦为x马 发表于 2015-8-9 18:18
老师您的意思是，FSC-SCC这两群都圈起来，然后再把CD3+圈起来---代表淋巴细胞，再把CD4+圈起来，我也有想 ...

用CD3/SSC设门会让你减少很多纠结之处。谁用谁知道：）

小憨

以梦为x马 发表于 2015-8-7 20:01
你也是做动物脾组织，然后用联科的破包膜的破膜液？因为我问了联科的技术他们做出来就是一群细胞，而且选 ...

我做的是脾组织，破膜液用的ebioscience。但我觉得你这个细胞FSC/SSC分两群不是破膜造成的你知道么。根据我自己的经验有两个原因可能造成细胞分两群：一个是红细胞裂解时稍微裂解过了，另外一个是T细胞活化以后细胞个头会变大（我不知道你是PMA+Ion还是CD3+CD28，后者尤为明显）。一般像这种情况，我会做CD3、4、IFN、IL-17四色配色，在FSC/SSC图中把两群全圈起来，或者干脆直接做CD3、4的散点图再反圈门看看。把CD3、4双阳性细胞（也就是CD4+ T cell）圈起来，再做IFN、IL-17散点图看，分泌IFN和IL-17的CD4+ T细胞各占总CD4+ T细胞的多少。

以梦为x马

niwanmao 发表于 2015-8-9 22:10
用CD3/SSC设门会让你减少很多纠结之处。谁用谁知道：）

谢谢老师

以梦为x马

小憨 发表于 2015-8-10 09:21
我做的是脾组织，破膜液用的ebioscience。但我觉得你这个细胞FSC/SSC分两群不是破膜造成的你知道么。根据 ...

非常感谢您耐心的回复，我没有裂红，用的是联科的PMA+离子霉素刺激，感觉应该圈2群，这边，我也怀疑是刺激活化后细胞变大，但两个问题困扰，1是我同学做人的IFN/IL-17，除了抗体不一样其他都一样，但是FSC-SCC他就只有1群；2是我自己用破核膜的也只有1群，不用的原因是因为会IFN/IL-17+T细胞比例下降。

niwanmao

以梦为x马 发表于 2015-8-10 10:07
非常感谢您耐心的回复，我没有裂红，用的是联科的PMA+离子霉素刺激，感觉应该圈2群，这边，我也怀疑 ...

做这玩意儿不裂红？那肯定不行，红细胞会形成很大的干扰、粘附。所以会造成你这种无法解释的异常。裂红是必须的。