实例告诉您，为什么抗体滴定这么重要？

yunshuizhixi

想请问一下，一楼的例子滴定结果应该是1/4推荐用量能够能更好的区分阴性和阳性峰，在这两种抗体用量的流式图中，阴性峰的位置没有发生明显移动，但是推荐用量的阳性峰较1/4推荐用量的要偏左。我在实验中也遇到这个问题，当抗体用量增加时阳性峰明显左移，请问是什么原因造成的这个现象呢？

niwanmao

yunshuizhixi 发表于 2017-2-23 21:43
想请问一下，一楼的例子滴定结果应该是1/4推荐用量能够能更好的区分阴性和阳性峰，在这两种抗体用量的流式 ...

最典型的变化应该是阴性群增高，而阳性群增高到一定程度就不继续增高了。
但我这里的滴定结果和你那边出现的现象，原因我也不能肯定，这里面我个人觉得是不是涉及到抗体和抗原结合的动力学，例如抗体过量后竞争性结合抗原位点，反而导致结合不牢固被洗涤？确实需要思考一下。

seall

想请教一下，滴定时要blocking 和染死活细胞吗，实际操作时是需要的。

niwanmao

seall 发表于 2018-12-5 23:49
想请教一下，滴定时要blocking 和染死活细胞吗，实际操作时是需要的。

有条件加。实际操作都不加。

風谷

学到了，分群不佳的时候可以考虑抗体的用量问题

hey，Jude

爱白衣杀手 发表于 2015-8-20 08:37
倪老师，我也发现了。推荐用量5ul其实太大了，只要1ul就非常好了。我滴定了八种抗体，5种是1ul,三种是0.25u ...

我想请教一下滴定和结果判定的具体步骤，第一次做，小白，。。。

niwanmao

hey，Jude 发表于 2019-10-10 13:06
我想请教一下滴定和结果判定的具体步骤，第一次做，小白，。。。

顶部搜索栏输入“滴定”，就能找到一堆，其中就有具体方法

lxk47640

倪老师，发现一个问题，就是你图上5ul的细胞的MFI比2.5ul 抗体染色的还要低，是不是电压调低过？所以滴定的时候电压是否需要保证一致？

niwanmao

lxk47640 发表于 2019-10-23 17:30
倪老师，发现一个问题，就是你图上5ul的细胞的MFI比2.5ul 抗体染色的还要低，是不是电压调低过？所以滴定的 ...

不是，没调过电压。
这就是抗体和抗原结合的钩状效应，因此需要确定一个最佳浓度，这个浓度一般不是最大，也不是最小。

陈景飞

倪老师，我想请教一个问题，做滴定的时候可以用别的组织做吗？比如我做胎盘，可以用spleen来做滴定吗？ 谢谢！