线粒体膜电位

jieam2007

倪老师，您是说是用骨髓单个核细胞中加入CD71＋GlyA＋抗体测JC-1呢？还是单个核细胞经过磁珠分选后再检测啊？我用的是后者，不知道行不行？

niwanmao

jieam2007 发表于 2016-12-4 00:18
倪老师，您是说是用骨髓单个核细胞中加入CD71＋GlyA＋抗体测JC-1呢？还是单个核细胞经过磁珠分选后再检测啊 ...

你提取骨髓单个核细胞的话，有核红就没了。
我不知道你的研究目的和设计的实验步骤是什么样的，无法评估啊。

jieam2007

不对吧倪老师，骨髓单个核细胞除了淋巴、单核以外，也包括有核红细胞和粒细胞的，我之前用Ficoll分离单个核细胞后加入CD71抗体，其中CD71+细胞占单个核的15%左右，同时加入AV/PI检测CD71+细胞的凋亡，但正常人的凋亡只有1%左右（这个问题在另一个帖子里问过您），目前这个结果让我分不清真假阳性，所以我又用JC-1方法继续检测凋亡，目前正在进行中。

niwanmao

jieam2007 发表于 2016-12-5 00:06
不对吧倪老师，骨髓单个核细胞除了淋巴、单核以外，也包括有核红细胞和粒细胞的，我之前用Ficoll分离单个核 ...

理论上应该PBMC提取后主要是淋巴细胞和单核，如果有这么高比例的有核红和粒细胞的话，说明提取不纯。

国外非正式发表的数据是：
In my experience as well as that of others, lymphocytes are typically in the range of 70 – 90% of PBMCs, monocytes range from 10 – 30% of PBMCs, while dendritic cells are rare, being only 1 – 2% of PBMCs.
链接：http://technical.sanguinebio.com ... sent-in-human-pbmc/

jieam2007

倪老师，这个说的是外周血，我做的是骨髓，有核红也不算在单个核里吗？

niwanmao

jieam2007 发表于 2016-12-7 08:20
倪老师，这个说的是外周血，我做的是骨髓，有核红也不算在单个核里吗？

Ficoll提取骨髓包不包含有核红细胞我无法回答，但粒细胞肯定不包含。

jieam2007

知道了倪老师，谢谢您！我是流式初学者，从流式中文网获益不少，谢谢倪老师每一次的认真解答

闷油瓶

niwanmao 发表于 2016-12-7 13:31
Ficoll提取骨髓包不包含有核红细胞我无法回答，但粒细胞肯定不包含。

老师，我做过很多HSC提取单个核细胞的培养（应该类似于骨髓），培养前期显微镜下可以看到很多红细胞颜色（铁锈色）的细胞克隆团，我估计就是传说中的有核红细胞，如果是的话，比例确实很高。

niwanmao

闷油瓶 发表于 2021-7-7 21:34
老师，我做过很多HSC提取单个核细胞的培养（应该类似于骨髓），培养前期显微镜下可以看到很多红细胞颜色 ...

如此看来Ficoll分不开单个核细胞和有核红了。