gMDSC和neutrophil如何区分

lxk47640

各位老师好，倪老师好，最近在做gMDSC，参照nature medicine的文章
分离PBMC（GE的PLUS淋巴分离液）后，用BD Fixable Viability Dye BV510，CD33-APC,HLA-DR-APC-H7,CD11b-PE-CY7,CD14-FITC,CD15-Percp-cy5.5
圈门策略一样
但是有多次，找的血常规正常的体检患者作为对照的gMDSC也比例相当高（>15%）,和文献报道完全不一致，上流式的老师说是可能有neutrophil的干扰（SSC,FSC那张图里面靠右上方有一群比例不低，且这一群多为CD33+,CD11B+,HLA-DR-，CD15+）
想知道是我的健康人群选择的问题（并不健康），还是PBMC提取存在问题？（但是如果是PBMC分离导致的差异，岂不是这个细胞的比例和操作者吸取白膜层的操作关系很大？）
有没有区分gMDSC和Neutrophil的marker？
跪求，头疼了

NATURE MEDICINE

lxk47640

附图是nature medicine发表的圈门策略

niwanmao

浏览了下你所说的这篇文章（http://www.nature.com/nm/journal/v21/n6/full/nm.3856.html），病人是挺高的，而且变异很大。
从这个门看，所谓的gMDSC我觉得就是未成熟粒细胞的一部分，而外周血中正常情况下应该不会很高，所以，我建议你挑选的健康人还是应该仔细筛选过其它检验指标，单看血常规不能作为依据的。如果你觉得还是不放心，可以标记胞内的Arginase I（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4408163/），但是那样的话会增加标记难度，实验结果可能更能把握。

lxk47640

niwanmao 发表于 2016-6-23 08:47
浏览了下你所说的这篇文章（http://www.nature.com/nm/journal/v21/n6/full/nm.3856.html），病人是挺高的 ...

我也准备检测Arginase在各PBMC亚群的表达，但好像根据NM那篇文章，arginase在Neutrophils中间表达也很高，MFI值和gMDSC重叠

lxk47640

niwanmao 发表于 2016-6-23 08:47
浏览了下你所说的这篇文章（http://www.nature.com/nm/journal/v21/n6/full/nm.3856.html），病人是挺高的 ...

为什么未成熟粒细胞会CD11b很高？根据粒细胞的成熟分化标记那张图，不是应该在成熟以后高表达么？再就是我做的CD11b和CD33的那个图和NM文献略有不同，如下图

lxk47640

我的CD33，CD11b图 不论病人健康人都有两个群(有的分开一点，有的连在一起但能区分出)，CD33更高的一群，和略高的一群，略高的那一群是HLA-DR-,更高的那一群是HLA-DR+

niwanmao

lxk47640 发表于 2016-6-23 21:03
我也准备检测Arginase在各PBMC亚群的表达，但好像根据NM那篇文章，arginase在Neutrophils中间表达也很高 ...

我的意思是未成熟的CD11b不高，所以外周血的gMDSC比例会低。
从你的图片看，这分群应该挺好，不一定跟它们完全一样。

liuhuan2018

请问一下楼主，这个问题解决了没

lxk47640

liuhuan2018 发表于 2021-4-15 16:38
请问一下楼主，这个问题解决了没

解决了 还是血样处理和健康对照的选取问题，健康人的新鲜样本是没有问题的

lxk47640

liuhuan2018 发表于 2021-4-15 16:38
请问一下楼主，这个问题解决了没

结果已经发表在2018年9月 Science Translational Medicine