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楼主: 李昆13579

[凋亡检测] Annexin V+/PI双染用流式细胞仪做活性污泥生物膜的凋亡

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 楼主| 发表于 2016-7-28 09:52:47 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-7-24 21:35
细菌好像没看到谁测过Annexin V 的凋亡,都是用核酸染色区分死活。
至于藻类,植物类的细胞壁结构应该也染 ...

也谢谢老师的回复。
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 楼主| 发表于 2016-7-28 09:54:51 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-7-24 21:35
细菌好像没看到谁测过Annexin V 的凋亡,都是用核酸染色区分死活。
至于藻类,植物类的细胞壁结构应该也染 ...

谢谢老师的及时回复
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 楼主| 发表于 2016-7-28 11:38:59 | 显示全部楼层
lilifirst 发表于 2016-7-28 09:36
上边我们同事解答了大肠杆菌凋亡的操作步骤。以下是植物做细胞凋亡的方法:
(1)去掉细胞壁提取原生质。
(2) ...

老师:有用染料 SYTOX-Green或者SYBRgreenⅠ( SYBR)方法直接染色有细胞壁的藻类,怎么解释呢?是两种染料能直接通过细胞壁而检测细胞膜的通透性来检测细胞的死亡情况吗?那么这样一来不就有无细胞壁无所谓了吗?就不用除去细胞壁了吗?
文章:Flow cytometric analysis of phytoplankton viability following viral infection
摘要:
Two flow cytometric assays using physiological probes were used on the phytoplankton species Phaeocystis pouchetii and Micromonas pusilla to examine the assays' utility in detecting viral infections. Dead cells were detected using the membrane impermeant nucleic-acid dye SYTOX-Green, which stains algal cells that have lost their membrane integrity. Live cells were detected using the membrane permeant dye Calcein-AM, which is hydrolyzed by intracellular esterases into a green fluorescent charged form. We found that both assays are easy to use, are reproducible and can indeed be used as markers of the viability of individual phytoplankton cells following infection by viruses. Cell death rates up to 0.8 d
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发表于 2016-7-29 00:04:18 | 显示全部楼层
李昆13579 发表于 2016-7-28 11:38
老师:有用染料 SYTOX-Green或者SYBRgreenⅠ( SYBR)方法直接染色有细胞壁的藻类,怎么解释呢?是两种染料 ...

是的,这两种染料都可以直接穿透细胞壁,选择性(细胞死活)穿透细胞膜。

AnnexinV的原理不同,是通过结合凋亡过程中,由细胞膜脂双层内层外翻到细胞表面的磷脂酰丝氨酸检测的。
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 楼主| 发表于 2016-7-29 11:34:30 | 显示全部楼层
kuzhierran 发表于 2016-7-29 00:04
是的,这两种染料都可以直接穿透细胞壁,选择性(细胞死活)穿透细胞膜。

AnnexinV的原理不同,是通过结 ...

那么请问老师:The live/dead staining(SYTO® 9 和PI两种和核酸染料双染后能上流式细胞仪检测吗),也就是说 SYTOX-Green或者SYBRgreenⅠ( SYBR)也是核酸染料吧
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发表于 2016-7-29 13:46:01 | 显示全部楼层
本帖最后由 kuzhierran 于 2016-7-29 14:14 编辑

都是核酸染料,SYTOX-Green当然可以通过流式检测,设置可以按照FITC来设置
请参考:http://www.thermofisher.com/cn/z ... ox-green-stain.html

另外分享一个PPT给你,我觉得其中很多实验你可以借鉴。我这边网速受限,上传实在太慢了,你自己下载吧,百度文库0下载券:)  

流式细胞仪在水生生物研究中的应用

http://wenku.baidu.com/link?url= ... HJ_2A0lVlGzbpakoFu_

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发表于 2016-7-29 19:51:34 | 显示全部楼层
李昆13579 发表于 2016-7-29 11:34
那么请问老师:The live/dead staining(SYTO® 9 和PI两种和核酸染料双染后能上流式细胞仪检测吗),也 ...

今天翻论坛帖子,发现其实很早以前发过测污泥微生物的PDF:http://www.flowcyto.cn/bbs/reade ... Ja98EYtBXZlfXej3AR4
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 楼主| 发表于 2016-7-30 10:23:16 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-7-29 19:51
今天翻论坛帖子,发现其实很早以前发过测污泥微生物的PDF:http://www.flowcyto.cn/bbs/reader.php?mod=f ...

谢谢老师提供的资料
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 楼主| 发表于 2016-7-30 10:24:33 | 显示全部楼层
谢谢老师
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