关于流式分析结果MFI的问题。

niwanmao

ruiyifeng 发表于 2016-12-5 11:08
感谢您的建议。我根据您的要求，重新做了一下分析，HEK293是无转染，A开头的是转染含有GFP的质粒，也就是 ...

看了半天才理解清楚。
文献中应该很简单，你在GFP/SSC散点图上，应该圈出如下两个门，蓝色是阳性转染细胞，红色是阴性细胞，你将这两个门内细胞的PC5.5荧光MFI分别计算出来，蓝色门PC5.5 MFI/红色门PC5.5 MFI就是你要的结果。这才是正确计算方法。

ruiyifeng

niwanmao 发表于 2016-12-5 19:33
看了半天才理解清楚。
文献中应该很简单，你在GFP/SSC散点图上，应该圈出如下两个门，蓝色是阳性转染细胞 ...

我明白您的意思了，但是红色门内本应该是阴性细胞，所以pc5.5荧光应该没有，红色门内MFI的计算是红色门内阳性/阴性，但是红色门内本无pc5.5荧光，也就是说本无阳性细胞，所以如何区分阳性和阴性，就算有很弱的荧光，那区分点就只能根据经验而定。而且我刚才计算了。红色门内因为大多都是阴性，所以MFI的值基本所以样品都差不多。 这样一来，用之前蓝色门内的MFI值计算，而红色MFI值所以样品数值几乎一致，所以蓝门PC5.5 MFI/红色门PC5.5 MFI的值的大小情况，和单纯蓝门MFI的大小情况应该是一样的，因为红门PC5.5MFI都差不多。会不会是我转染率低，所以阳性细胞数少，进而影响了蓝门荧光强度MFI的值？

niwanmao

ruiyifeng 发表于 2016-12-6 00:06
我明白您的意思了，但是红色门内本应该是阴性细胞，所以pc5.5荧光应该没有，红色门内MFI的计算是红色门内 ...

1、不管红色门内有没有PC5.5荧光，都直接算MFI，有荧光就MFI高，无荧光就MFI低，这已经真实反映染色强弱了呀。为什么还要去想办法设门啥的。

2、你仔细算算看，绝对不会出现矛盾现象。如果你算出来还是那样，说明你没搞清楚我的意思。

miliamlau

忍不住挖个坟：严谨地说，间接标记本来就不能用做定量实验，即使所有条件都一样也不能。因为信号增益不可能一样。