关于流式直方图的问题

steven

niwanmao 发表于 2017-4-24 22:08
测细胞的纯度就是用特异性的标记。你这个问题里面的目的我到现在也没搞清楚，如果你要测的这两个如此弱表 ...

老师你好 为了能让大家看明白 我画了一个图，不知道描述的是否清晰。@niwanmao

niwanmao

steven 发表于 2017-4-25 09:51
老师你好 为了能让大家看明白 我画了一个图，不知道描述的是否清晰。@niwanmao
...

从这篇文献《Isolation and Characterization of Quiescent Human Hepatic Stellate Cells For Physiological Modeling of Liver Metabolism and Function》看，GFAP确实无法分群。那么就没办法了，只能根据合适的阴性Control，画门分了。

steven

niwanmao 发表于 2017-4-25 20:25
从这篇文献《Isolation and Characterization of Quiescent Human Hepatic Stellate Cells For Physiolog ...

谢谢老师回复并且提供论文。
那么不能分群的原因可能是什么呢？为什么没能出现两个峰呢？
另外画门的话，从哪里画起合适呢？如我第一天上传的图上看，我从Control中完全没有荧光的部位画起的话，GFAP只有25.3%，但是像论文中一样，从包含一小部分Control的地方画起的话，估计GFAP可能会达到70%左右，差距很大，是不是也说明这种方法检测细胞纯度的结果非常依赖门的设定啊，不能准确知道纯度呢？

steven

niwanmao 发表于 2017-4-26 19:03
不分群原因就是这个抗原的表达量不够多，从统计学上无法与阴性细胞群分开。
例如阳性细胞表达的分子个数50 ...

谢谢老师 这回弄明白了

steven

niwanmao 发表于 2017-4-19 14:39
不分群原因就是这个抗原的表达量不够多，从统计学上无法与阴性细胞群分开。
例如阳性细胞表达的分子个数50 ...

倪老师你好，今天又看了一遍您的总结，觉得有几个细节还是不太明白。
第一，选用特异性抗体，阴性细胞应该不表达，所以也就不存在阴性细胞0-70分子表达，阳性50-100分子表达的情况了吧。
第二，当抗原弱表达的时候，如果不能明确地分成两群，直方图的形状也应该是偏态分布的吧（因为在Control的基础上表达某一强度荧光的数量增多），但我做的这个结果都是正态分布的图形原因可能是那些呢？
谢谢

niwanmao

steven 发表于 2017-5-22 15:03
倪老师你好，今天又看了一遍您的总结，觉得有几个细节还是不太明白。
第一，选用特异性抗体，阴性细胞应该 ...

1、阴性细胞不表达，那是最最理想的状态，就像理想状态下匀速运动应该是没有摩擦力一样。实际上阴性细胞可以表达一些分子，可以结合一些抗体，只是量不足。
2、你做的标记如何分布，我建议做了再看，目前只是纯属虚构：）

steven

niwanmao 发表于 2017-5-22 19:51
1、阴性细胞不表达，那是最最理想的状态，就像理想状态下匀速运动应该是没有摩擦力一样。实际上阴性细胞 ...

嗯 好的。这次做的同型对照有些问题，下次再做一次试试。

闷油瓶

steven 发表于 2017-5-22 15:03
倪老师你好，今天又看了一遍您的总结，觉得有几个细节还是不太明白。
第一，选用特异性抗体，阴性细胞应该 ...

朋友还在做这个实验吗？可以为解决你的疑惑（抗原弱表达细胞与阴性细胞的峰为什么只有一个峰，并且测出来为啥不是两个峰而只是稍微的平移的问题）提供一个研究思路。

steven

闷油瓶 发表于 2021-5-14 22:17
朋友还在做这个实验吗？可以为解决你的疑惑（抗原弱表达细胞与阴性细胞的峰为什么只有一个峰，并且测出来 ...

谢谢你，这个实验做完了，但是还是希望可以帮我解答一下这个问题，因为做流式分析的话这个问题总会遇到。

Fzw

遇到类似的问题，看完帖子的讨论 猜想会不会是倪老师说的+两个峰部分重叠？
1. 峰整体平移（包括阴性）的问题-->倪老师解释的0-70与50-100的例子
2. 只有一个峰-->个人感觉肉眼看出正态分布是不是不太准啊，有没有可能是两个峰的重叠或者大峰远远盖过了小峰？网上任意找了个图示意一下