关于流式直方图的问题

steven

Fzw 发表于 2021-6-29 11:35
遇到类似的问题，看完帖子的讨论 猜想会不会是倪老师说的+两个峰部分重叠？
1. 峰整体平移（包括阴性）的问 ...

感谢你的回答，而且你提供的图片也很有帮助（特别是图1）。
这个是4年前的问题了，当时刚接触流式，有很多不明白的地方，感谢大家帮忙解答。
现在想想就是当时太理想化了，阴性就定义为表达量为0，但实际上对于特异性不是特别好的marker来说，阴性阳性的差异可能很小，最后就是混成一群了。
正因为如此，流式更适合于检测单一种类细胞的某种marker的变化规律，而对于混合种类细胞中测细胞纯度这种事情，除非有十分特异的marker（可以分群），要不然结果不仅不可信，而且造成很多困扰（无法正确区分阳性起点）。以上为个人理解，未经证实，哈哈哈。

steven

小憨 发表于 2017-4-20 17:57
第一个问题，我觉得这样理解你看行不行。关于阳性细胞，主要看你把阈值画在哪个位置，超过这个阈值可以定为 ...

回过头来再看4年前的回答，终于对你的回答有了更深的认识。
确实如何确定阳性细胞是个问题，对照组（未染一抗）实际上作为对照组是不合适的，因为目的细胞之外的细胞也可能弱表达目标marker，因此对照组（未染一抗）并未准确的指示阳性的起点。所以能分群的marker（分类变量）才适合准确判断混合细胞中目标细胞的纯度，而这种差异很小的情况（连续变量）更适合判断单一细胞某种marker的变化特点，测纯度的话很难应用。
再次感谢。

niwanmao

steven 发表于 2021-6-30 14:34
感谢你的回答，而且你提供的图片也很有帮助（特别是图1）。
这个是4年前的问题了，当时刚接触流式，有很 ...

混合群体，即使分群不清，并非不可信，而是需做好对照。

steven

niwanmao 发表于 2021-6-30 21:33
混合群体，即使分群不清，并非不可信，而是需做好对照。

确实如此，但是如何选择正确的对照有时候很困难。就我的例子来讲，即使同型对照也不能正确指示混合群体中弱表达细胞的荧光基础值。

niwanmao

steven 发表于 2021-7-1 14:31
确实如此，但是如何选择正确的对照有时候很困难。就我的例子来讲，即使同型对照也不能正确指示混合群体中 ...

同型对照，之前多个帖子提到过，不是好的对照。
最佳的对照——生物学阴性对照。
次佳——FMO（当荧光渗漏是主要的背景时）、Fc Block

steven

niwanmao 发表于 2021-7-1 21:20
同型对照，之前多个帖子提到过，不是好的对照。
最佳的对照——生物学阴性对照。
次佳——FMO（当荧光渗 ...

学习了。

fuweichao

倪老师好，请问生物学阴性对照怎么定义？

niwanmao

fuweichao 发表于 2021-11-23 09:42
倪老师好，请问生物学阴性对照怎么定义？

生物学阴性对照，指的是相同种属的样本中，与靶细胞大小、颗粒度相似，且天然不表达该标记的细胞，就是生物学阴性对照。
举个例子，假如我们要测CD19的表达，就可以用T细胞作为阴性对照，分析B细胞的比例。