ROS总是检测不好，这几点技巧是否对你有用？

cynthia

niwanmao 发表于 2021-11-11 08:13
首先把阳性对照做出来吧，因为只有阳性对照做出来了，才说明试剂、步骤都没问题，此时再找加药组出不来的 ...

好的，谢谢您的意见，那我先增加阳性对照浓度试试能不能把阳性做出明显趋势来。

cynthia

niwanmao 发表于 2021-11-11 08:13
首先把阳性对照做出来吧，因为只有阳性对照做出来了，才说明试剂、步骤都没问题，此时再找加药组出不来的 ...

倪老师，我还是把我的流式结果报告贴上来，这是流式老师帮我操作的，是她一并发过来的报告。tube 1-5 依次是阴性，加药组1，加药组2，阳性组1，阳性组2。老师能在百忙之中抽空看看，实在是感激不尽！！说不定能给我指点一下迷津！谢谢老师！

niwanmao

cynthia 发表于 2021-11-11 10:09
倪老师，我还是把我的流式结果报告贴上来，这是流式老师帮我操作的，是她一并发过来的报告。tube 1-5 依 ...

你将这些样本按阴性、加药组1、阳性组1，三个叠加在一起，可看出区分度。从数字看，应该有趋势，但不明显。所以先摸索和优化一下实验细节。

cynthia

niwanmao 发表于 2021-11-11 10:39
你将这些样本按阴性、加药组1、阳性组1，三个叠加在一起，可看出区分度。从数字看，应该有趋势，但不明显 ...

谢谢您的回复，阳性组1其实比阴性还低，阳性组2反而还稍高一点点点。加药组2是高的最多的，虽然也只是高一点点。直方图把三个叠加在一起，实在是不能看，几乎是重叠的。老师，现在我的问题就是不知道应该如何改进实验方案和条件，我已经不知道哪里可能会出问题了，这是我做的第四遍，也改了四遍条件，所以实在是想不到突破口，才来这里请您赐教！

niwanmao

cynthia 发表于 2021-11-11 10:45
谢谢您的回复，阳性组1其实比阴性还低，阳性组2反而还稍高一点点点。加药组2是高的最多的，虽然也只是高 ...

如果确认操作没问题，我建议换成Thermo的ROS试剂再做做看。

cynthia

niwanmao 发表于 2021-11-12 09:59
如果确认操作没问题，我建议换成Thermo的ROS试剂再做做看。

谢谢您的回复，我再自己试试看！

caodinglingge

倪老师，想请教一下，您之前说过“胰酶消化收集细胞并用PBS洗2次后上机”，那么这个不需要用血清中和胰酶吗？如果这时候用血清的话肯定会影响探针的，请问这个是怎么解决的？谢谢！

云木香

cynthia 发表于 2021-11-10 22:17
谢谢倪老师的回复，我已经跟他们那边交流很多次了，除了让我增加阳性对照的浓度，也没有其他方案提供给我 ...

这个我问过碧云天的技术了，给的回复说，他们的阳性对照确实是有问题的，不能保证所有细胞都能使用，我也买他们的，确实是不行。

云木香

倪老师您好，请问 能不能仅用空白细胞调试电压，而不划分ROS 阳性和阴性区域，在最后的样品处理探针孵育后计算一整个的平均荧光强度。

我的考虑点是，ROS探针在检测细胞ROS时，是根据细胞中ROS含量来反映的，ROS含量越多，图形越往右移，在直方图中是一个连续的表现形式，而不是像其他探针一样明显的把细胞分为阳性和阴性两群（泾渭分明）。

niwanmao

云木香 发表于 2021-11-20 19:56
倪老师您好，请问 能不能仅用空白细胞调试电压，而不划分ROS 阳性和阴性区域，在最后的样品处理探针孵育后 ...

可以的，是有文献这么做的。