结肠固有淋巴细胞的treg细胞染色问题

niwanmao

chenmj363 发表于 2019-4-15 16:07
老师好，我把区域调节到淋巴细胞区域，可以看到cd4,cd25的染色情况，但是从图中判断染色情况不是特别理想 ...

染色是不好，PE 电压偏低。

chenmj363

niwanmao 发表于 2019-4-15 17:44
染色是不好，PE 电压偏低。

老师，PE电压不足说明没有染上是吧？还是抗体存在一定问题了呢

h951595223

固有层淋巴细胞你确定剪碎消化就可以分出？

chenmj363

h951595223 发表于 2019-4-16 17:45
固有层淋巴细胞你确定剪碎消化就可以分出？

我看文献是这么描述的，您是如何做的呢，谢谢老师

小外星人

楼主第一次修的那些图，圈出来的部分根本不是淋巴细胞所在的位置，而且从图中也看出并没有成功分出淋巴细胞，所以倪老师说的对。后面秀的图里圈的才应该是淋巴细胞所在的群。
用percoll分没有问题，注意percoll的密度，GE公司，sigma公司买到的都是原液，密度是110%的，要稀释成工作液100%，后再继续稀释成不同浓度进行淋巴细胞分离。还有一点，如果你的模型的结肠的淋巴细胞很少，可以尝试不要用淋巴细胞分离液分了，那会丢失细胞，可以在消化酶消化后，洗掉消化液后，直接染色，也就是跳过percoll的步骤。

lalasa

我跟你遇到了一样的问题，我也是组织标本Treg的CD4染不上，想问你这个问题解决了吗？拜谢

niwanmao

lalasa 发表于 2019-10-16 16:05
我跟你遇到了一样的问题，我也是组织标本Treg的CD4染不上，想问你这个问题解决了吗？拜谢 ...

你可以先按照楼上的办法逐一对照，找自己的实验问题所在。如果都对不上，再传图，与大家讨论。建议开新帖。

lalasa

niwanmao 发表于 2019-10-17 08:59
你可以先按照楼上的办法逐一对照，找自己的实验问题所在。如果都对不上，再传图，与大家讨论。建议开新帖 ...

好的，谢谢倪老师！