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楼主: 甜鼠肉乎乎
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[细胞增殖] CFSE脾脏淋巴细胞增殖图,向大家请教

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发表于 2019-7-22 11:00:06 | 显示全部楼层
看看结果,cona刺激三天。
CD3.jpg
发表于 2019-8-7 20:53:55 | 显示全部楼层
immunology 发表于 2019-5-19 15:00
首先没懂楼主的图例到底是什么意思?楼主帖子中说CFSE浓度用了两个分别是2.5uM和5uM,图例上发现CFSE的浓度 ...

你好,我前几天刚刚做了一次CFSE增殖实验,也是做不出来。想请教一下您。您说激活的细胞在显微镜下观察会出现比较明显的细胞团簇,是会浮起来吗?还有显微镜下观察细胞,会影响CFSE荧光吗。
发表于 2019-8-27 15:47:55 | 显示全部楼层
行棋无悔 发表于 2019-8-7 20:53
你好,我前几天刚刚做了一次CFSE增殖实验,也是做不出来。想请教一下您。您说激活的细胞在显微镜下观察会 ...

我用PHA刺激小鼠脾脏细胞和淋巴结细胞,细胞成团明显,当然做的比较粗,算预实验,也没有预先分选一下。显微镜下确实看到细胞成簇很明显,但是没观察到明显的增殖,并且与CD3和CD28共刺激淋巴细胞的活化有明显的差别,CD3和CD28刺激T细胞以后,细胞会变大很明显,也能看出来明显的增殖,而PHA刺激以后,只是成团成簇,没有观察到明显的增大和分裂增殖情况。不知道您指的漂浮是什么意思?
发表于 2019-8-31 22:15:33 | 显示全部楼层
qscdawx 发表于 2019-7-18 13:54
之前做过一些人的T细胞增殖实验,效果不错,能看到明显的多次的增殖峰,可能会和小鼠有一些不同,但是可以 ...

请问您,用您这个浓度刺激的话,淋巴细胞多久就会在显微镜下有肉眼可见的反应?24h会有吗?
发表于 2019-9-2 11:40:11 | 显示全部楼层
immunology 发表于 2019-8-31 22:15
请问您,用您这个浓度刺激的话,淋巴细胞多久就会在显微镜下有肉眼可见的反应?24h会有吗? ...

24H就可以看到明显的细胞变大和成团现象,跟抗体浓度相关。
用CD3/CD28的beads的话效果会更好,但是激活太强的话,背景太高,可能会看不出实验组的区别
发表于 2019-9-27 22:58:37 | 显示全部楼层
有个问题想向您请教一下,淋巴细胞的96孔板如何换液?淋巴细胞是悬浮细胞,是直接用排枪轻轻吸上清,吸一半加一半么?还是需要离心?
发表于 2019-9-28 15:11:34 | 显示全部楼层
immunology 发表于 2019-9-27 22:58
有个问题想向您请教一下,淋巴细胞的96孔板如何换液?淋巴细胞是悬浮细胞,是直接用排枪轻轻吸上清,吸一半 ...

需要板式离心机
发表于 2019-12-26 21:01:35 | 显示全部楼层

倪老师,您好,我想问一下,如果只是单纯看T细胞增殖的情况,画门的时候是要把母代和子代都圈住吗?还是只需要圈子代细胞呢?谢谢!
发表于 2019-12-26 21:02:15 | 显示全部楼层

倪老师,您好,我想问一下,如果只是单纯看T细胞增殖的情况,画门的时候是要把母代和子代都圈住吗?还是只需要圈子代细胞呢?谢谢!
发表于 2019-12-27 17:44:23 | 显示全部楼层
南瓜妹妹 发表于 2019-12-26 21:02
倪老师,您好,我想问一下,如果只是单纯看T细胞增殖的情况,画门的时候是要把母代和子代都圈住吗?还是 ...

都要圈的,在Modfit软件里面分析,比较简单,把父代细胞设好,然后再拉好间隔,就自动拟合出来了。
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