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[结构和原理] 请教 荧光蛋白 激发波长与发射波长的基础

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发表于 2020-1-17 14:51:29 | 显示全部楼层 |阅读模式
5流星
本帖最后由 lysfes 于 2020-1-17 14:51 编辑

各位老师好,我实验室新入手流式细胞仪一台,我基础较为薄弱,一些理论知识比较空白。
今天诚心向各位老师请教,望不吝解答!


现有流式细胞仪一台,BD Facsverse
蓝激光:488nm;通道,FSC、SSC、FITC、PE、PE-Cy5、PE-Cy7
红激光:640nm;通道,APC、APC-Cy7

我们在做实验时有个情况,

如:MitoScene Red CMXRos,Ex/Em = 579/599nm
实际上,我们用488激发后,在PE(565-607)是能检测得到信号的。


为此,我感到疑惑,对于荧光素的激发和发射有以下几个提问:
1.为何Ex=579的荧光素,能够被488的蓝激光激发?
2.Ex=450的或者更低的能否被488激光激发?
3.Ex是指最佳激发波长吗?那实际激发波长可以是一个范围值吗?
4.这种范围值是怎么确定的,有无参考的资料?


请各位老师、同行不吝赐教!


发表于 2020-1-17 18:40:48 | 显示全部楼层
你第三点理解对的,就是这句话可以解释你的疑惑。
至于450一般激发不了。
范围,可以参考荧光素特性,但是一般每个厂家(例如BD、Biolgend)的spectrum viewer可以查看。
 楼主| 发表于 2020-1-19 23:36:20 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-1-17 18:40
你第三点理解对的,就是这句话可以解释你的疑惑。
至于450一般激发不了。
范围,可以参考荧光素特性,但是 ...

谢谢倪老师,春节快乐!

点评

新春快乐  发表于 2020-1-20 09:00
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