为什么加了荧光抗体之后荧光强度还降低？

112358answer

都是只有一个荧光标记吗

素医

112358answer 发表于 2020-5-8 08:41
都是只有一个荧光标记吗

是的，单染管

素医

niwanmao 发表于 2020-5-8 08:38
1、空白对照只用于大致的了解电压水平是否合适，拿来做设门，是不合理的。
2、为什么出现这种情况，目前 ...

想给您再看下这个图。这个图最左边两个是空白对照，右边是实验组。我很理解您说的不能按空白组圈门，这里圈出来只是为了方便看一下，相对空白组我觉得从直接看起来RORrt-PE的最低荧光强度还中规中矩，但是T-bet-PE-CY7的话它的最低荧光强度却明显下移了。这两组实验组也是同样的处理方式，所有处理包括加抗体的都一样（这两组实验组非单染管），并且都是核转录因子。若按您说的如果是处理原因的话那应该RORrt也应该出现一样的情况。可是他却没有，相似的还有几个抗体标志也有类似情况，由于课题原因不便放上来。会不会是跟抗体有关系，或者机器的该通道硬件有关系？

niwanmao

素医 发表于 2020-5-8 12:50
想给您再看下这个图。这个图最左边两个是空白对照，右边是实验组。我很理解您说的不能按空白组圈门，这里 ...

这个标记没有出现问题，更加说明前面那个可能是处理的原因了，实验过程中，多多少少会有意外因素参与，所以才会出现之前那个偶然性的异常，而ROR和其它标记没有问题。

机器和抗体的可能性都可以排除。

我觉得你现在没必要纠结于此，而是继续做下去，用正确的对照设门、分析。

素医

niwanmao 发表于 2020-5-8 19:03
这个标记没有出现问题，更加说明前面那个可能是处理的原因了，实验过程中，多多少少会有意外因素参与，所 ...

好的，十分感谢您~