流式操作时需要的最低细胞量

chujindong

niwanmao 发表于 2011-6-26 16:28

                               
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首先明确的是，胞内破膜之后，FSC和SSC肯定会改变，这是无法改变的现实。

我平时的操作步骤与你略有不同 ...

谢谢倪老师！您说的“第6、7、8都是10-15分钟”是指孵育时间？可是你们不是也用的BD公司的破膜剂吗？我是按说明书设计操作步骤的。
加了FIX/PERM以后确实不需要裂红了，改变裂红步骤确实可以。

niwanmao

chujindong 发表于 2011-6-26 22:06

                               
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谢谢倪老师！您说的“第6、7、8都是10-15分钟”是指孵育时间？可是你们不是也用的BD公司的破膜剂吗？我是 ...

哦，我只用了BD FACS Permeabilizing Solution 2这一个组分，你可能用的是Kit，可能Kit中的最后一个成份有裂红功能吧。我做的步骤是按照以前用caltag破膜剂的步骤，因为原理是一样的。

wangyekai

niwanmao 发表于 2011-6-26 16:28

                               
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首先明确的是，胞内破膜之后，FSC和SSC肯定会改变，这是无法改变的现实。

我平时的操作步骤与你略有不同 ...

倪老师，一般破膜后，FSC和SSC会呈现增大还是减少的趋势？

niwanmao

wangyekai 发表于 2011-6-27 19:32

                               
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倪老师，一般破膜后，FSC和SSC会呈现增大还是减少的趋势？

不一定。但是我做的时候基本上都变小。

chujindong

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我用的是Kit，这个盒子包含两部分，一个是洗液，另一个是固定/破膜剂，没有把固定剂跟破膜剂分开。

niwanmao

chujindong 发表于 2011-6-27 22:41

                               
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我用的是Kit，这个盒子包含两部分，一个是洗液，另一个是固定/破膜剂，没有把固定剂 ...

一般都是作用10－15分钟的。
有批号吗？

chujindong

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货号是554714.批号我查了再说吧。

niwanmao

chujindong 发表于 2011-6-28 21:08

                               
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货号是554714.批号我查了再说吧。

我最近用的是这个用于细胞因子的破膜剂：http://www.bdbiosciences.com/ptP ... =search&mterms=true

不用批号，我其实意思是指货号，刚才说错了。应该是你用的这个更正宗才对。不过胞内标记可能是比较难做，稳定性不佳，所以我们目前在全国流式细胞术学组里面讨论的免疫分型方案时，一般都指出，在不确定系列时才会做胞内。

chujindong

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原来是这样啊。我只是在设计课题时看文献做胞内的比较多，确实不知道这个稳定性不好，还是实践少了。那么“不确定系列”是指什么？可以举例吗？我设计的还包括了Th1/2的胞内流式，这个是“确定”的吗？请指教。

niwanmao

chujindong 发表于 2011-6-29 00:07

                               
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原来是这样啊。我只是在设计课题时看文献做胞内的比较多，确实不知道这个稳定性不好 ...

呵呵，这个是中文词语的多样性造成了你的误解。
我说的“不确定系列”完整的说应该是“不确定原始细胞的系列来源”，比如某病人的标本只有CD117阳性，而CD13、CD33、CD7、CD19等标记都阴性，或者伴CD7阳性，这时我却高度怀疑这个病人是原始髓系来源的细胞，但感觉证据不是很足，就是不能完全确定，那么怎么办呢？做个胞内的MPO标记，来确定一下。

你做Th1/Th2的流式当然需要做胞内的，因为IL-4、IFN-γ等标记是必须做胞内的。