流式操作时需要的最低细胞量

一成天

niwanmao 发表于 2011-6-26 16:28

                               
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首先明确的是，胞内破膜之后，FSC和SSC肯定会改变，这是无法改变的现实。

我平时的操作步骤与你略有不同 ...

请问倪老师，可以用EDTA-K2盐抗凝全血检测吗？可肝素抗凝的有区别不？

niwanmao

一成天 发表于 2011-6-29 16:04

                               
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请问倪老师，可以用EDTA-K2盐抗凝全血检测吗？可肝素抗凝的有区别不？

需要看你的检测目的是什么，如果是血小板的活化指标，就不适合用肝素：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=256

chujindong

回复 一成天 的帖子

关于抗凝剂，有许多专门研究这个的文献。众说纷坛，我曾经查过这方面的文献，都有各自的道理。确实如倪老师所说，看你检测的是什么了。我觉得你所作的实验一定牵扯到许多试剂，试剂说明书中有的会专门对抗凝剂提出要求，尤其是国外进口的产品。如果没有要求的话，应该是都可以的。如果你还没有买试剂，买试剂的时候也要注意实际说明书中的要求，挑选没有特别要求的产品或者是其提出的要求与你所使用的抗凝剂相符。

wangyekai

niwanmao 发表于 2011-6-27 19:46

                               
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不一定。但是我做的时候基本上都变小。

恩，同感！

xx_ss

老师，你好~我也是用流式的固定/破膜试剂做Th17的检测，但是不知道为什么一直没有染出阳性细胞。
我的步骤中，染色都是放在4℃，6、8都放了4℃30min，7是直接洗涤的。请问这些操作会有影响吗？
请指教~

niwanmao

xx_ss 发表于 2011-7-6 11:12

                               
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老师，你好~我也是用流式的固定/破膜试剂做Th17的检测，但是不知道为什么一直没有染出阳性细胞。
我的步骤 ...

胞内的标记步骤一般问题不是很大，像你这样7直接洗涤也是可以的。关键是同样的步骤，不同的人做也可能会出现略有偏差的结果，因为胞内标记对技术操作要求很高。

有没有阳性细胞有时候可能也会跟分析有关，建议你下次做完之后，可以按照这个帖子这样的图发一个上来，大家讨论讨论：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum ... =2428&fromuid=1

xx_ss

恩恩~谢谢老师~下次做的时候把图存下来再请教大家~
另外就是，我们在操作过程中要注意些什么~手法呀~什么的~
我就照着步骤做~有的胞内能染出来，有的做不出来~
望请教~

niwanmao

xx_ss 发表于 2011-7-6 12:26

                               
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恩恩~谢谢老师~下次做的时候把图存下来再请教大家~
另外就是，我们在操作过程中要注意些什么~手法呀~什么的 ...

前面说过，胞内标记对技术操作要求很高，结果跟很多因素有关，尽可能使自己的技术条件成熟，这是追求的境界：）

xx_ss

恩恩~明白的~
就是想知道在老师的经验中，在操作过程中有什么注意事项吗？
我会努力使自己的技术更加成熟的~
谢谢啦~

niwanmao

xx_ss 发表于 2011-7-6 13:13

                               
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恩恩~明白的~
就是想知道在老师的经验中，在操作过程中有什么注意事项吗？
我会努力使自己的技术更加成熟的 ...

1、振荡充分，但又不能太剧烈，最好是用手指弹。
2、孵育时间上需要摸。
3、固定、破膜之后，如果有些破膜剂不含裂红成份的话，裂红这一步放到最后。
这是我的几点感受。