小鼠PBMC流式检测后散射图显示的都是碎片吗？

我是二十 · 发表于 2018-9-5 17:22:56

我用淋巴细胞分离的方法获取小鼠PBMC，转速为1500rpm，15min，流式上机检测后，散射图如图所示，这是什么原因呢？都是细胞碎片吗？
希望各路大神老师给予指导！感谢

mybiosciences · 发表于 2018-9-5 22:07:32

FSC增大也拉不出来细胞群吗？
如果拉不出来，很可能是细胞丢失了
离心的时候不要用转速表示，用离心力，不同离心机之间可以比较的参数是离心力，细胞用300-400Xg即可

robert1988 · 发表于 2018-9-5 22:15:50

FSC 和 SSC 电压需要加吧

我是二十 · 发表于 2018-9-6 17:15:55

mybiosciences 发表于 2018-9-5 22:07
FSC增大也拉不出来细胞群吗？
如果拉不出来，很可能是细胞丢失了
离心的时候不要用转速表示，用离心力，不 ...

增大了也没有细胞群，关键是不知道细胞丢失在哪一步了，除了离心，我再孵育抗体之后，冰箱4度将样本放置了大约3小时，不知道会不会影响？

我是二十 · 发表于 2018-9-6 17:16:46

robert1988 发表于 2018-9-5 22:15
FSC 和 SSC 电压需要加吧

增加了也没有细胞群出现

18832287133 · 发表于 2018-9-8 08:25:03

坐标太大了吧，把坐标缩小一下试试，FSC大概在1000到2000之间

niwanmao · 发表于 2018-9-8 10:40:05

如果反复调节电压都出不来，并且其它样本都是正常的话，就可以确定是这个样本的问题了。

mybiosciences · 发表于 2018-9-8 22:54:21

是提取的小鼠外周血pbmc吗？
直接染色溶血或者溶血染色就可以啊，干嘛要提取，丢失太严重了。
细胞丢失一般就是在离心的过程中丢的，每次离心去上清后都会丢失百分之十以上，严重的能丢一半

我是二十 · 发表于 2018-9-11 11:14:50

18832287133 发表于 2018-9-8 08:25
坐标太大了吧，把坐标缩小一下试试，FSC大概在1000到2000之间

谢谢啦！这个机器是uava的，后来联系工程师说这个坐标改不了，就把lin改成了log

我是二十 · 发表于 2018-9-11 11:23:13

niwanmao 发表于 2018-9-8 10:40
如果反复调节电压都出不来，并且其它样本都是正常的话，就可以确定是这个样本的问题了。 ...

谢谢老师，那要是样本的问题的话就是说这个都是死细胞或细胞碎片吗？我后来用胸腺做的散射图是这样的，调大电压以后也没有明显的细胞分群，是有什么具体问题吗？希望老师能指导一下

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