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[标本处理] 小鼠PBMC流式检测后散射图显示的都是碎片吗?

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发表于 2018-9-5 17:22:56 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
我用淋巴细胞分离的方法获取小鼠PBMC,转速为1500rpm,15min,流式上机检测后,散射图如图所示,这是什么原因呢?都是细胞碎片吗?
希望各路大神老师给予指导!感谢


小鼠PBMC散射图

小鼠PBMC散射图
发表于 2018-9-5 22:07:32 | 显示全部楼层
FSC增大也拉不出来细胞群吗?
如果拉不出来,很可能是细胞丢失了
离心的时候不要用转速表示,用离心力,不同离心机之间可以比较的参数是离心力,细胞用300-400Xg即可
发表于 2018-9-5 22:15:50 | 显示全部楼层
FSC 和 SSC 电压需要加吧
 楼主| 发表于 2018-9-6 17:15:55 | 显示全部楼层
mybiosciences 发表于 2018-9-5 22:07
FSC增大也拉不出来细胞群吗?
如果拉不出来,很可能是细胞丢失了
离心的时候不要用转速表示,用离心力,不 ...

增大了也没有细胞群,关键是不知道细胞丢失在哪一步了,除了离心,我再孵育抗体之后,冰箱4度将样本放置了大约3小时,不知道会不会影响?
 楼主| 发表于 2018-9-6 17:16:46 | 显示全部楼层
robert1988 发表于 2018-9-5 22:15
FSC 和 SSC 电压需要加吧

增加了也没有细胞群出现
发表于 2018-9-8 08:25:03 | 显示全部楼层
坐标太大了吧,把坐标缩小一下试试,FSC大概在1000到2000之间
发表于 2018-9-8 10:40:05 | 显示全部楼层
如果反复调节电压都出不来,并且其它样本都是正常的话,就可以确定是这个样本的问题了。
发表于 2018-9-8 22:54:21 | 显示全部楼层
是提取的小鼠外周血pbmc吗?
直接染色溶血或者溶血染色就可以啊,干嘛要提取,丢失太严重了。
细胞丢失一般就是在离心的过程中丢的,每次离心去上清后都会丢失百分之十以上,严重的能丢一半
 楼主| 发表于 2018-9-11 11:14:50 | 显示全部楼层

RE: 小鼠PBMC流式检测后散射图显示的都是碎片吗?

18832287133 发表于 2018-9-8 08:25
坐标太大了吧,把坐标缩小一下试试,FSC大概在1000到2000之间

谢谢啦!这个机器是uava的,后来联系工程师说这个坐标改不了,就把lin改成了log
1.jpg
 楼主| 发表于 2018-9-11 11:23:13 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-9-8 10:40
如果反复调节电压都出不来,并且其它样本都是正常的话,就可以确定是这个样本的问题了。 ...

谢谢老师,那要是样本的问题的话就是说这个都是死细胞或细胞碎片吗?我后来用胸腺做的散射图是这样的,调大电压以后也没有明显的细胞分群,是有什么具体问题吗?希望老师能指导一下
胸腺.jpg
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