教你一招：如何设置实验中的对照？

baolei0606 · 发表于 2014-4-11 22:05:42

倪老师，您好，我用BD公司的c6做大鼠外周血TH1/TH2分型，我如以下设计，您看如何：
管1-----IL-4同型对照+IFN-γ同型对照
管2-----CD3-FITC+CD8-PERCP+IL-4-PE+IFN-γ同型对照
管3-----CD3-FITC+CD8-PERCP+IFN-γ-ALEXA 647+IL-4同型对照
管4-----CD3-FITC+CD8-PERCP+IL-4-PE+IFN-γ-ALEXA 647

niwanmao · 发表于 2014-4-11 22:56:25

baolei0606 发表于 2014-4-11 22:05
倪老师，您好，我用BD公司的c6做大鼠外周血TH1/TH2分型，我如以下设计，您看如何：
管1-----IL-4同型对照+I ...

第一管你是想用来调节电压吗？
原则上是可以这么设置的。

baolei0606 · 发表于 2014-4-12 15:29:18

管1应该是-----CD3-FITC+CD8-PERCP+IL-4同型对照+IFN-γ同型对照，C6好像是不能调电压。
那实际操作中是否可以去掉某些管。
第一个样本这样设置，剩下的样本只检测管4就行了吧？

niwanmao · 发表于 2014-4-12 16:19:42

baolei0606 发表于 2014-4-12 15:29
管1应该是-----CD3-FITC+CD8-PERCP+IL-4同型对照+IFN-γ同型对照，C6好像是不能调电压。
那实际 ...

对对对，C6，没注意你前面写的机型。
管1用不用问题不大，只要管2和3即可。

塞着耳机在路上 · 发表于 2016-9-21 10:32:21

倪老师，您好，我在小鼠EAE模型中同时检测脊髓，脾和淋巴结中Th1,Th17和Treg的表达，抗体配色为FITC-CD4,PerCP/Cy5.5-CD45,PE-Cy7-IFNγ，APC-Cy7-IL17A, BV421-Foxp3, APC-CD25和aqua. 我是流式新手，实验中有很多问题想请教一下您：
1.我们调节补偿只用了每个抗体对应的CD4的单染，看了您的帖子，PE-Cy7-IFNγ和APC-Cy7-IL17A是不是不能用CD4代替单染啊？所以我是需要用确定表达IL-17A和IFNγ的细胞做APC-Cy7-IL-17A和PE-Cy7-IFNγ的单染吗？
2.由于脊髓细胞比较少，我们每次做单染的都用脾细胞做，但是我们发现脊髓细胞和脾细胞的阴性和阳性细胞群位置不一样，甚至淋巴结细胞和脾细胞也不太一样，我是否需要每种细胞都做一套单染来调节补偿？
3.做FMO对照的时候抗体可以用相同荧光的CD4的抗体代替么？还是必须要用染色时用的抗体，例如APC-CD25是否可以用APC-CD4代替？

niwanmao · 发表于 2016-9-21 20:11:49

塞着耳机在路上发表于 2016-9-21 10:32
倪老师，您好，我在小鼠EAE模型中同时检测脊髓，脾和淋巴结中Th1,Th17和Treg的表达，抗体配色为FITC-CD4,Pe ...

你这些表面抗原和胞内因子一般分群都很好的，不用对照都没问题。补偿根据细胞分群都可以直接调。

happyeday · 发表于 2016-9-22 16:07:11

倪老师：您好！刚学习了关于对照的帖子。想问您一下，如果用转染了GFP的细胞做凋亡分析，染料用的是7AAD和PE。这样的情况需要是否需要一个未转染的细胞+7AAD和PE作为其中的一个FMO？

1060990080 · 发表于 2017-8-14 18:22:43

如此看来8/9/10管是一模一样的，为啥要重复做三次呢？？补偿对照就是单染，FMO就是依次减去一种荧光~

niwanmao · 发表于 2017-8-14 19:02:22

1060990080 发表于 2017-8-14 18:22
如此看来8/9/10管是一模一样的，为啥要重复做三次呢？？补偿对照就是单染，FMO就是依次减去一种荧光~ ...

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