测定PBMC中的CD4＋Th1、Th2和Th17亚群

niwanmao

PBMC（人外周血单个核细胞）中的T细胞由多个功能不同的亚群组成，CD4＋和CD8＋T细胞可简单划分为初始、中央记忆、效应记忆、终末效应等亚型。如前述帖子中所述（http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2350-1-1.html），CD3、CD4、CD8、CD45RA或CD45RO、CCR7或CD62L等标记可将T细胞划分为上述亚群。
而通过T细胞活化时表达的细胞因子，可将T细胞进一步划分为Th1、Th2、Th17等亚群。
每种Th亚群均通过表达特定的细胞因子和趋化因子而发挥独特的功能。但需要指出的是，记忆性T细胞在不同的Th诱导条件下，可转化为不同的亚型。通过多参数流式细胞术，每种Th亚群均可通过其表达的细胞因子、转录因子、表面标记（包括趋化因子受体）而鉴定出来，其中表面标记最容易做，转录因子由于在胞浆内或核内，需要类似于FoxP3破膜剂等进行破膜，而胞内细胞因子则需要用抗CD3和抗CD28或联合Phorbol 12-Myristate 13-Acetate (PMA)和Ca2+离子载体，离子霉素刺激TCR方可产生，这过程通常需要4－6小时，并且需要蛋白转运抑制剂布雷菲德菌素A或莫能霉素（浓度需按照不同的细胞因子分别优化）。

Th1可促进对病毒或胞内细菌的细胞免疫。Th1细胞可通过多种方式鉴定，IFN γ（γ干扰素）是最常见而直接的功能指标，此外，趋化因子CXCR3和CCR5也被认为与Th1相关。转录因子T-bet（TBX21）是调节Th1分化的主要因子，尽管Th17可能也表达TBX21，但亦可作为Th1鉴定的辅助标记之一。有趣的是，上述标记的表达并不完全与IFN γ表达一致，例如，在中央记忆性T细胞，CXCR3＋细胞被认为是前Th1细胞，但它们不表达IFN γ，而在效应记忆性T细胞中，部分CCR5＋和CXCR3＋细胞会表达IFN γ。因此，在分析时对不同标记测定出的比例、功能均需要进行仔细比较。
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深入阅读：
Heterogeneity of CD4+ memory T cells: functional modules for tailored immunity. Sallusto F, Lanzavecchia A. Eur J Immunol. 2009 Aug;39(8):2076-82.
Chemokine receptor expression identifies Pre-T helper (Th)1, Pre-Th2, and nonpolarized cells among human CD4+ central memory T cells. Rivino L, Messi M, Jarrossay D, Lanzavecchia A, Sallusto F, Geginat J. J Exp Med. 2004 Sep 20;200(6):725-35.
Human T cells that are able to produce IL-17 express the chemokine receptor CCR6. Singh SP, Zhang HH, Foley JF, Hedrick MN, Farber JM. J Immunol. 2008 Jan 1;180(1):214-21.
Selective expression of a novel surface molecule by human Th2 cells in vivo. Nagata K, Tanaka K, Ogawa K, Kemmotsu K, Imai T, Yoshie O, Abe H, Tada K, Nakamura M, Sugamura K, Takano S. J Immunol. 1999 Feb 1;162(3):1278-86.

圈儿113

真的 从来没有做出过这么好看的图、、。。。。不知道为什么TH亚型刺激不出来

2424149750

单独用抗CD3和抗CD28可以吗，刺激时间和浓度有类似的可以参考的文章吗