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流式细胞仪的技术在不断进步，其获取速度、灵敏度、应用范围在不断扩大，往往一个标本可以获取成千上万个数据点，如何找到最好的方法来比较这些数据，是流式分析中的重点。在流式分析中最易被误解或误用的工具就是MFI。
什么是MFI？
MFI（平均荧光强度），是算术平均数、几何平均数、中位荧光强度的统称。在理想情况下，数据应该是正态分布，平均数（means）、中位数（median）、众数（mode）三个值是相等的。但实际情况下，流式数据几乎都不是正态分布的，数据倾斜得越大，平均值就越向倾斜方向漂移。
众数（Mode）统计学名词，是一组数据中出现次数最多的数值，有时众数在一组数中有好几个。
因为荧光强度通常用LOG模式获取，故算术平均数此时无法统计此类数据，就需要改用几何平均数（gMFI）。但值得一提的是，gMFI对于log正态分布的数据代表性非常好，但对于倾斜同样非常敏感（大家可以用实际数据试试）。因此，对于非正态的数据，只剩下中位数可用了，中位数受数据的倾斜、极端值等影响很小。所以在目前情况下，一般来说，中位数是最安全的MFI指标。
图：MFI三种类型在正态分布和非正态分布情况下的位置
MFI三种类型在正态分布和非正态分布情况下的位置
MFI使用时常见的三个错误：
1、用MFI来描述一个双峰分布的细胞群体：一个双峰细胞群，并非正态，而且具有两个类似正态的群体，故MFI不适合。此时，选择阳性峰进行阳性百分比分析更有统计意义。
2、比较不同实验中的MFI：因为MFI对实验条件很敏感（如抗体稀释度、串联染料的降解、激光的波动等），所以比较不同次实验中间的MFI是非常危险而且不正确的做法。
3、盲目使用MFI作为表达的定量指标：流式可以对抗原的表达进行定量，但需要依赖于对标准曲线的校准和滴定。而且，并不是说某细胞群MFI高，其表达量就高，MFI低，其表达量就低，还需要考虑细胞大小、补偿等因素。
那么，我们如何正确使用MFI呢？
MFI有一些重要的用途，但很多情况下，它非但没有对我们的数据起到证明作用，反而起到干扰作用。故建议只有当你认为MFI是你证明实验结果最好的比较方法，并且MFI使用时没有发生上述错误时，才使用它。
进一步阅读参考文献：
Nature Immunology的一篇评论 Interpreting flow cytometry data: a guide for the perplexed
http://facs.scripps.edu/ni0706-681.pdf
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发表于 2013-6-4 16:24:58
发表于 2013-6-4 21:46:57
