我的细胞周期很奇怪

蓝悦

我在做流式的周期和凋亡中遇到很奇怪的现象。
1、我一直想做细胞周期中的Sub-G1峰，但是无论什么方法都做不出来。
2、我做了细胞凋亡，其中显示很有很多凋亡细胞的。可是周期里面就是没有亚凋亡峰，这很奇怪。
3、我的细胞周期中的峰很奇怪，很多都是G1峰比较矮，无论是正常细胞还是加药的。这些跟同步化有关吗？，或者和什么有关呢？
4、我做的细胞凋亡中的细胞分区很不明显，不知道是细胞的原因，还是因为仪器的原因。
5、我用的细胞仪是BD C6。不知道这些是否和流式细胞仪有关。因为是初学者，所以有很多不明白的地方，查了两个月的资料，仍然没有解决，希望大家能帮帮我。

niwanmao

1、请传一下周期的原始数据文件上来看看。
2、AV/PI法检测出来凋亡，一则AV单阳性属于早期的，二则有些细胞本身就不一定会出现亚二倍体，所以对不上是正常的。
3、还是得看你的原始数据是否有问题。
4、得看原始数据。
5、如果用的是C6的话，可能是跟仪器有关，这个仪器的数据文件确实跟其它机器有些不同，以前有位站友也传过C6的，似乎没法分析周期。

蓝悦

1、我以前做周期的结果，我觉得看起来还行。但是，我想得到一个亚凋亡峰！我一开始以为是细胞晚凋才出现亚周期峰，所以就做了一个凋亡，随之对应的做了一下细胞周期，结果惨不忍睹！细胞凋亡了很多，但是亚周期峰还是没出来。顿时就凌乱了。
2、不知道是不是细胞状态不好的问题，还是什么地方出了问题。
3、数据中0是没有加药的，1是加了1μg/ml的药物。
4、我用的是HepG2细胞。

蓝悦

如何传数据呢！传不上去

蓝悦

以前做的周期.zip (2.7 MB, 下载次数: 4)

2014-5-14 20:54 上传

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niwanmao

蓝悦 发表于 2014-5-14 21:00

昨天想分析的，后来忙着忘了。
在其它分析软件上看了下C6的数据，发现都是FL2-A/FL2-W都是一个很长的长条。modfit也无法分析。后来想到C6数据的大跨度，于是今天用同样有大范围分析和缩放功能的ACEA Novocyte软件分析，发现奥秘所在，原来你所需要放大的只是其它一小段。

未放大前的图形：




选择放大前面这幅图的P2（绿色），就可以看到典型的细胞周期分布图了，前面那个P2门是我在放大后画的singlet门，你注意这个位置就行了。



由于无法使用细胞周期拟合软件，所以你只能用直方图画门的方式圈比例了。

chymanhz

niwanmao 发表于 2014-5-16 20:41
昨天想分析的，后来忙着忘了。
在其它分析软件上看了下C6的数据，发现都是FL2-A/FL2-W都是一个很长的长条 ...

Novoexpress不是带周期分析的功能，就在等高线图右边

niwanmao

chymanhz 发表于 2014-05-17 00:20:48

                               
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Novoexpress不是带周期分析的功能，就在等高线图右边

拟合不好，而且无法分析subG1

蓝悦

恩恩！那么我这个C6做出来的周期数据就只能是用ACEA Novocyte软件进行分析了哦！
我试试看吧！
2、老师，我的凋亡数据中，为什么正常的细胞死亡率也是那么高呢？我的细胞是贴壁细胞，是不是我处理的方式不好！我已经尽量很小心的去处理细胞了。在处理细胞之前我在镜下观察，起始细胞看起来还行。可是一处理，上机的结果就很不好！

niwanmao

蓝悦 发表于 2014-5-19 21:31
恩恩！那么我这个C6做出来的周期数据就只能是用ACEA Novocyte软件进行分析了哦！
我试试看吧！
2、老师，我 ...

乙醇固定法是可能容易产生很多死细胞。如果你用乙醇固定法做不好，可以考虑买个BD cycletest plus做，不过成本较贵。