求助小鼠红细胞裂解后的白细胞分群

33flower

本人想要裂解红细胞后，根据FSC和SSC划分单核细胞群分析CD11b和CD115荧光染色。遇到了点问题：为什么小鼠红细胞裂解后出现了R1区，而中性粒细胞群大量减少。

右下方的单核细胞群跟淋巴细胞群的界限分的不是很清楚。
咨询了下其他人，说R1是死细胞。  那么是不是中性粒细胞在这过程中大量死亡导致的？
如果是，那么要注意哪些点才可以减少这些细胞死亡呢？
或者这些中性粒细胞的死亡会不会对我后面分析单核细胞群标记的表达有影响呢？
谢谢了

niwanmao

你这些细胞的分群是如下图这样的，出现状态差的细胞数量过多，其原因较多：
1、会不会你的裂解液成份有问题？
2、小鼠抽血后的标本保存问题？

一般标志不太会影响，不过获取时为了避免这些细胞影响，你可以设置一个门，只圈淋巴、单核、粒这三群，然后设置成只获取该门内的细胞，这样可以减少死细胞的干扰。

33flower

niwanmao 发表于 2014-6-3 21:02
你这些细胞的分群是如下图这样的，出现状态差的细胞数量过多，其原因较多：
1、会不会你的裂解液成份有问题 ...

谢谢倪老师。
裂解液用的是BD的。
小鼠血液是眼球摘除取的血，血液存放到临床用的含EDTA的抗凝管，充分混匀后冰上放置保存。
做了好几次都是这样，像单核跟淋巴的界限分的不是特别清楚，设门时感觉有困难。
不知道倪老师有什么建议，我的实验处理是通过药物改变小鼠循环中的单核细胞数量，目的是想通过流式来检测单核细胞数量上的改变。抗体选用了CD11b和CD115。
不知道怎样能更好的描述单核细胞的改变

niwanmao

33flower 发表于 2014-6-10 21:32
谢谢倪老师。
裂解液用的是BD的。
小鼠血液是眼球摘除取的血，血液存放到临床用的含EDTA的抗凝管，充分混 ...

CD115和CD11b也可以吧，也可以用CD14更特异一点。

33flower

niwanmao 发表于 2014-6-10 21:41
CD115和CD11b也可以吧，也可以用CD14更特异一点。

对于FSC/SSC分群不是特别清楚的细胞，染了特异性抗体后应该怎样分析呢？
做了几次感觉圈单核细胞群分析两种抗体分布，跟不圈门分析所有白细胞的两种抗体分布
两种图的分布差别感觉比较大

niwanmao

33flower 发表于 2014-6-10 21:48
对于FSC/SSC分群不是特别清楚的细胞，染了特异性抗体后应该怎样分析呢？
做了几次感觉圈单核细胞群分析两 ...

就圈CD11b和CD115双阳性细胞，进行绝对计数，这样不行么？

33flower

niwanmao 发表于 2014-6-10 21:57
就圈CD11b和CD115双阳性细胞，进行绝对计数，这样不行么？

好的，谢谢。
想用CD45对白细胞进行个初筛，去掉红细胞和碎片的干扰再看双标的结果。
选抗体的时候针对哪个肽段会好点呢？

niwanmao

33flower 发表于 2014-06-10 23:51:11

                               
登录/注册后可看大图

好的，谢谢。
想用CD45对白细胞进行个初筛，去掉红细胞和碎片的干扰再看双标的结果。
选抗体的时候针对哪

如果用cd45，直接就可以把单核很好的分出来，cd11b,cd115都省了

ambassador

33flower 发表于 2014-6-10 21:32
谢谢倪老师。
裂解液用的是BD的。
小鼠血液是眼球摘除取的血，血液存放到临床用的含EDTA的抗凝管，充分混 ...

请问你淋巴细胞和单核细胞后来分开来了吗？能分享下你是怎么将他们很好的分开的吗？

我怀疑是不是FSC、SSC电压调节上的问题？

niwanmao

ambassador 发表于 2014-06-21 11:32:26

                               
登录/注册后可看大图

请问你淋巴细胞和单核细胞后来分开来了吗？能分享下你是怎么将他们很好的分开的吗？

我怀疑是不是FSC、S

加一个CD45就可以了