教你正确调节补偿

niwanmao · 发表于 2016-6-28 16:26:39

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做出一个成功的流式结果，电压要调节好，抗体要滴定好，还有一点很重要，就是补偿要调节好。

这里，从美天旎公司的技术视频https://www.youtube.com/watch?v=jCQC-86fCN4 上截取部分图片，与大家分享补偿调节的要求和原则。

首先来看一下正确和错误的补偿调节，下图中，左侧是未调节补偿的，中间是正确调节补偿，右侧是补偿过度的，判断正确补偿的指标就是阴性细胞和阳性细胞群的MFI：

补偿调节示例

了解了这点，再掌握以下的补偿调节原则，基本上就能横着走了：

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补偿原则

其中的第3点和第6点，来看一下下面这张图就知道了，同样是APC-Vio770荧光，用CD8和CD45RA调节出的补偿值就不同：

串联染料补偿

yaolinjuan1989 · 发表于 2016-6-28 21:35:19

把仪器整体的调好了，有些时候个别的抗体配一起还得调

niwanmao · 发表于 2016-6-28 22:20:42

yaolinjuan1989 发表于 2016-6-28 21:35
把仪器整体的调好了，有些时候个别的抗体配一起还得调

是不是含串联染料，或者细胞性质相差比较大？

yaolinjuan1989 · 发表于 2016-6-28 22:28:06

不是串联染料，那应该是性质相差太大吧？比如CD23PE和CD15FITC我们把它组合一起了，粒细胞CD23就出现假阳，很阳但是图形是长条形的，把补惨单独调下就很好看了。

niwanmao · 发表于 2016-6-29 08:15:13

yaolinjuan1989 发表于 2016-6-28 22:28
不是串联染料，那应该是性质相差太大吧？比如CD23PE和CD15FITC我们把它组合一起了，粒细胞CD23就出现假阳， ...

你当时调节补偿是用什么？Beads吗？那是不同的，因为CD15粒细胞表达很高的，你beads首先颗粒度与粒细胞不同，其次荧光可能还不如粒细胞高，因此补偿值会不同。

yaolinjuan1989 · 发表于 2016-6-29 19:10:18

哦！明白了，我们用的是单染管，一般用CD3、CD2、CD7、CD45，圈淋巴门

yangguo1018 · 发表于 2016-7-14 16:28:59

谢谢楼主!

cneagle · 发表于 2017-4-10 08:14:56

谢谢分享

ghqiu09 · 发表于 2017-4-20 15:58:42

我想问问倪老师，这种情况多见吗？我做流式往往都是做好几组标记分子，如果一组标记就要一组的补偿的话，的确有点麻烦了。有的时候还限于样品有限的原因

小外星人 · 发表于 2019-2-14 22:16:09

请问老师：6）串联染料调节补偿必须不同批次、不同种类需另外调节。这个不明白，请指点

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