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[图片] Treg检测推荐采用的抗体组合

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发表于 2017-5-2 19:49:06 | 显示全部楼层 |阅读模式

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Treg已经有大量的文献研究,证实其与癌症预后密切相关,Treg数量高、活性强,往往会使癌症患者OS缩短。

流式细胞术对Treg的精确计数受到两个因素阻碍:
(a)无法直接测量其功能。
(b)不存在排他性、高度特异性的标记。

因此,2015年Santegoets 等人发表在Cancer Immunol Immunother上的《Monitoring regulatory T cells in clinical samples: consensus on an essential marker set and gating strategy for regulatory T cell analysis by flow cytometry》一文收集了研究中使用的17个标记,在10名专家中达成了关于Treg计数的基本标记共识。共识汇总如下表:
Treg.jpg

大家认为,理想的Treg组合应该是:
首先,基本标记组合应该能够排除掉那些表达Treg基本标记、但不产生IFNγ和IL-2的其它T细胞。

其次,由于设门时采用了三种Treg定义(CD25posCD127lowFoxp3pos Tregs、Foxp3posHeliospos Tregs、Foxp3hiCD45RAneg aTreg和Foxp3intCD45RApos nTregs),所以鉴定的细胞群应该是高度特异性的,并且所有这三个定义至少包括相同的Treg群体。

第三,推荐的组合应该是稳健、无争议,并且不受设门位置轻微移动影响,因为已经发现设门的差异是测量误差的最大来源。

第四,如果可能,应该能够评估其功能。


这里提到设门位置的放置,其实值得很多做科研FLOWER借鉴的是,和临床免疫分型类似,作者亦提倡使用内对照,即采用CD3pos CD4neg和CD3neg设置CD25、CD127、Helios、CD45RA等标记的阴阳性分界位置,这样比FMO、同型更稳健、更可靠。

最后形成的Treg检测方案是:

必需:CD3、CD4、CD25、Foxp3、CD127。
强烈推荐:Ki67、CD45RA。
可选:CTLA4、Helios、CD39、LAP/GARP

文献来源:https://link.springer.com/article/10.1007%2Fs00262-015-1729-x
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发表于 2017-5-3 16:34:57 | 显示全部楼层
好东西 谢谢分享
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发表于 2017-5-22 15:33:44 | 显示全部楼层
想请教一下,我CD25和需要破膜的一起染就会掉,就是在需破膜的panel里就染不上,是什么原因呢。
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 楼主| 发表于 2017-5-22 19:51:42 | 显示全部楼层
长风万里无云 发表于 2017-5-22 15:33
想请教一下,我CD25和需要破膜的一起染就会掉,就是在需破膜的panel里就染不上,是什么原因呢。 ...

已回复:http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5893-1-1.html
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发表于 2017-12-27 11:35:46 | 显示全部楼层
觉得很有帮助。
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