查看: 252|回复: 12
收起左侧

[标本处理] 流式检测IL-10的刺激方法

[复制链接]
发表于 2019-4-10 21:10:23 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
需要流式技术分析IL-10, 但每次都检测不出,考虑刺激方法需改进,请问有什么可以怎么刺激?

发表于 2019-4-10 21:41:36 | 显示全部楼层
LPS,开个玩笑, 刺激不出来是你的人品问题,闭着眼睛都能刺激高水平il10
 楼主| 发表于 2019-4-12 08:42:50 | 显示全部楼层
那请问兄台,你闭着眼刺激出高水平的IL-10有多高呢?
发表于 2019-4-12 08:55:56 | 显示全部楼层
目前的刺激方法和使用的试剂能否说明一下呢?一起找找问题所在看。
 楼主| 发表于 2019-4-12 10:04:11 | 显示全部楼层
肝素管收集患者全血,于含250ul1640培养基的孔板加入250ul全血(或250ul单核细胞),并加入PMA(50ng / mL),离子霉素(250ng / mL)和布雷菲德菌素A(5μg/mL),于37℃  5%CO2条件下培养约5-7小时。收获细胞,并进行表面染色,将细胞固定/透化(eBioscience)并用IL-10染色,流式检测。
发表于 2019-4-12 13:22:59 | 显示全部楼层
一枝孤芳 发表于 2019-4-12 10:04
肝素管收集患者全血,于含250ul1640培养基的孔板加入250ul全血(或250ul单核细胞),并加入PMA(50ng / mL) ...

看条件还可以,种下去的细胞量和收获的细胞量分别是多少?
发表于 2019-4-15 15:23:19 | 显示全部楼层
我用pma 50ng/ml  离子霉素1ug/ml  BFA 1ug/ml  莫能霉素1ug/ml
 楼主| 发表于 2019-4-16 08:46:31 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-4-12 13:22
看条件还可以,种下去的细胞量和收获的细胞量分别是多少?

没有镜下数过,这个影响大吗,那一般要多少细胞量比较合适?
 楼主| 发表于 2019-4-16 08:47:34 | 显示全部楼层
飞鸿317 发表于 2019-4-15 15:23
我用pma 50ng/ml  离子霉素1ug/ml  BFA 1ug/ml  莫能霉素1ug/ml

我那个BFA是含有莫能霉素的混合物
发表于 2019-4-16 17:20:15 | 显示全部楼层
一枝孤芳 发表于 2019-4-16 08:47
我那个BFA是含有莫能霉素的混合物

我用的也是PMA+IONOMYCIN, 兄台有没有试过加一个阳性对照,比如跟IFN-gmma或者TNF-a一起检测,排除一下是不是破膜的问题
您需要登录后才可以回帖 登录 | 加入流式中文网

本版积分规则

关闭

本站推荐上一条 /1 下一条

流式中文网    

联系我们: mail#flowcyto.cn (#改为@)

GMT+8, 2019-6-16 19:30

Powered by Discuz! X3.2

© 2001-2013 Comsenz Inc.