流式检测IL-10的刺激方法

一枝孤芳 · 发表于 2019-4-10 21:10:23

需要流式技术分析IL-10，但每次都检测不出，考虑刺激方法需改进，请问有什么可以怎么刺激？

qingshi · 发表于 2019-4-10 21:41:36

LPS，开个玩笑，刺激不出来是你的人品问题，闭着眼睛都能刺激高水平il10

一枝孤芳 · 发表于 2019-4-12 08:42:50

那请问兄台，你闭着眼刺激出高水平的IL-10有多高呢？

niwanmao · 发表于 2019-4-12 08:55:56

目前的刺激方法和使用的试剂能否说明一下呢？一起找找问题所在看。

一枝孤芳 · 发表于 2019-4-12 10:04:11

肝素管收集患者全血，于含250ul1640培养基的孔板加入250ul全血（或250ul单核细胞）,并加入PMA（50ng / mL），离子霉素（250ng / mL）和布雷菲德菌素A（5μg/mL），于37℃ 5%CO2条件下培养约5-7小时。收获细胞，并进行表面染色，将细胞固定/透化（eBioscience）并用IL-10染色，流式检测。

niwanmao · 发表于 2019-4-12 13:22:59

一枝孤芳发表于 2019-4-12 10:04
肝素管收集患者全血，于含250ul1640培养基的孔板加入250ul全血（或250ul单核细胞）,并加入PMA（50ng / mL） ...

看条件还可以，种下去的细胞量和收获的细胞量分别是多少？

飞鸿317 · 发表于 2019-4-15 15:23:19

我用pma 50ng/ml 离子霉素1ug/ml BFA 1ug/ml 莫能霉素1ug/ml

一枝孤芳 · 发表于 2019-4-16 08:46:31

niwanmao 发表于 2019-4-12 13:22
看条件还可以，种下去的细胞量和收获的细胞量分别是多少？

没有镜下数过，这个影响大吗，那一般要多少细胞量比较合适？

一枝孤芳 · 发表于 2019-4-16 08:47:34

飞鸿317 发表于 2019-4-15 15:23
我用pma 50ng/ml 离子霉素1ug/ml BFA 1ug/ml 莫能霉素1ug/ml

我那个BFA是含有莫能霉素的混合物

stf1990 · 发表于 2019-4-16 17:20:15

一枝孤芳发表于 2019-4-16 08:47
我那个BFA是含有莫能霉素的混合物

我用的也是PMA+IONOMYCIN, 兄台有没有试过加一个阳性对照，比如跟IFN－gmma或者TNF－a一起检测，排除一下是不是破膜的问题

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[标本处理] 流式检测IL-10的刺激方法