这俩染料需要调节补偿么？

niwanmao

jiangmeng 发表于 2016-12-23 02:24
老师你好，请教一个问题。 比如我们检测某个细胞的ROS，用的探针是用FITC这个通道检测的，那么我们可不可 ...

ROS的探针是在FITC检测，但其检测原理和普通CD分子不是完全一样，是渗透入细胞内，与细胞内的ROS起反应后发出荧光。所以不是很建议，最好能够找一个像普通表面分子那样染色的最好，步骤一致，相当于把其它因素都控制一样了。

PI也不建议代替PE，因为两者激发光和发射光不完全一致。

会开花的笔

我觉得还是要调一下吧，因为我做的percp3通道和apc4通道，交叉图会有尖尖，所以可能稍微调一下应该可以，虽然从原理上不用调，但是实践起来还是有差别的吧，拙见，，

jiangmeng

niwanmao 发表于 2016-12-23 08:07
ROS的探针是在FITC检测，但其检测原理和普通CD分子不是完全一样，是渗透入细胞内，与细胞内的ROS起反应后 ...

谢谢老师。
老师，我有几个问题：
1.  如果我用PI排除死细胞，那么抗体是不是不能有带PE的抗体？这样会有影响吗？
如果是这样的情况，那么用DAPI是不是也不能同时加用相应颜色的抗体？
还是只需要逻辑上分开就行了，因为我检测的都是活细胞，所以不用管PI或者DAPI的问题。

2. 排除死细胞是不是每个样本，包括对照组都需要加用PI或者DAPI？

3. 流式抗体直接一抗带荧光的好？还是二抗带荧光的？还有如果没有相应的直接一抗带荧光的抗体，需要使用二抗带荧光的抗体，那么这时候我们应该怎么设置相应的对照组？如阴性对照等等