这俩染料需要调节补偿么？

jiangmeng

niwanmao 发表于 2016-12-7 13:30
1、不管分析几个标记，只要在一管内，并且荧光光谱之间存在重叠，就需要调节补偿。
2、你这个已经属于多 ...

老师，我不需要做组合分析。就分析单个抗原分子之间的差别。这时候还要做FMO吗？不是只有多种抗体组合一起分析才需要吗？

什么时候才需要设置同型对照呢？

niwanmao

jiangmeng 发表于 2016-12-8 00:01
老师，我不需要做组合分析。就分析单个抗原分子之间的差别。这时候还要做FMO吗？不是只有多种抗体组合一 ...

是否要调节补偿，是否用FMO，只跟搭配有关，与分析方法无关。

不需要同型对照，只用FMO设门。

jiangmeng

niwanmao 发表于 2016-12-8 08:17
是否要调节补偿，是否用FMO，只跟搭配有关，与分析方法无关。

不需要同型对照，只用FMO设门。 ...

那这样的话，我干脆每个样本之加入一个抗体，就不用调节补偿和FMO了。
什么情况下需要使用同型对照呢？

jiangmeng

niwanmao 发表于 2016-12-8 08:17
是否要调节补偿，是否用FMO，只跟搭配有关，与分析方法无关。

不需要同型对照，只用FMO设门。 ...

当一个样本里面加入了几种抗体的时候需要FMO?

niwanmao

jiangmeng 发表于 2016-12-9 06:48
那这样的话，我干脆每个样本之加入一个抗体，就不用调节补偿和FMO了。
什么情况下需要使用同型对照呢？ ...

你这两个问题一起回答：
1、同型对照可用，十分难挑到真正的同型对照。如果没有挑对，就不建议用于设门，只适合用于观察背景水平，原因请参考《同型对照，是如何让你抓狂的？》。
2、即使你非常幸运挑到了正确的同型对照，还是需要事先Fc阻断，尤其是IgG1和IgG2a亚型的。方法教程参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5510-1-1.html。
3、每个样本加一个抗体确实不需要调节补偿，也不需要FMO对照，但是你的设门依据需要根据生物学阴性对照来设门（概念同样参照前面那个链接）。
4、只要你加入的抗体荧光素之间存在补偿，就需要用FMO对照。

jiangmeng

niwanmao 发表于 2016-12-9 08:23
你这两个问题一起回答：
1、同型对照可用，十分难挑到真正的同型对照。如果没有挑对，就不建议用于设门， ...

谢谢老师，搞清楚了这个问题。

jiangmeng

niwanmao 发表于 2016-12-9 08:23
你这两个问题一起回答：
1、同型对照可用，十分难挑到真正的同型对照。如果没有挑对，就不建议用于设门， ...

像ＢＤ公司，ＢＩＯ－Ｌｅｇｅｎｄ公司买抗体的页面上面就有相应的同型对照的选项可以一起打包购买。这样不需要去挑选吧？

jiangmeng

niwanmao 发表于 2016-12-9 08:23
你这两个问题一起回答：
1、同型对照可用，十分难挑到真正的同型对照。如果没有挑对，就不建议用于设门， ...

我们一直都用ＦＢＳ＋ＰＢＳ孵育抗体，这个应该能起到阻断作用的吧？

niwanmao

jiangmeng 发表于 2016-12-11 01:32
我们一直都用ＦＢＳ＋ＰＢＳ孵育抗体，这个应该能起到阻断作用的吧？

关于阻断，请段时间写过帖子，注意搜索。
如果你非要用同型，那么可以按照他们产品页面推荐的买，但不能保证。

jiangmeng

niwanmao 发表于 2016-11-7 08:39
很小，因为两者激发光不一样，所以他们会在不同光路上。

老师你好，请教一个问题。 比如我们检测某个细胞的ROS，用的探针是用FITC这个通道检测的，那么我们可不可以用ROS作为FITC的单染管调节补偿；类似的可不可以用PI代替PE做单染管做补偿？