提取PBMC计数内皮祖细胞 问题多多

niwanmao

ganlimi 发表于 2011-8-9 15:54

                               
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请问谁有BD的溶血素借我啊？我已经订货了，但是还要等一个月啊。实验紧迫。哎。 ...

为什么不自己配呢？我觉得自己配的氯化铵裂解液并不比买来的效果差。配方见：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=178

chujindong

niwanmao 发表于 2011-8-9 17:16

                               
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为什么不自己配呢？我觉得自己配的氯化铵裂解液并不比买来的效果差。配方见：http://www.flowcyto.cn/bbs ...

我们用的也是自己配的氯化铵裂解液，效果还可以。按理说一般的化学试剂国产的就应该不错的。似乎BD的配方不一样吧？

niwanmao

chujindong 发表于 2011-8-9 18:43

                               
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我们用的也是自己配的氯化铵裂解液，效果还可以。按理说一般的化学试剂国产的就应该不错的。似乎BD的配方 ...

是的，商业化的裂解液配方是保密的，但效果才是真道理。

ganlimi

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学习了:)

ganlimi

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吸取大家的意见，用100ul全血做了，请看图。

chujindong

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你圈了两群细胞啊？图做的挺漂亮的

dragonhzqsmmu

我个人觉得全血测定EPCs的比例用CD34\CD133\KDR三阳来确定问题还是比较多的，首先就是比例太低了，我看LZ做的是人的标本还是小鼠的标本？文献好像报道都在1%左右，个人认为其中的取样和个体误差无法排除；再次最好用三标阳性这样说明力度更大

dragonhzqsmmu

还有一个小问题请教，LZ第一副图有关细胞的FSC和SSC的散点图中FSC<200的为空白，是手动把细胞碎片去除了还是电压调节的原因，多谢

niwanmao

dragonhzqsmmu 发表于 2011-8-24 07:35

                               
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还有一个小问题请教，LZ第一副图有关细胞的FSC和SSC的散点图中FSC

这样的图形都是因为设置了FSC阈值的缘故，低于某个阈值的细胞碎片便被排除在外了。

niwanmao

dragonhzqsmmu 发表于 2011-8-24 07:33

                               
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我个人觉得全血测定EPCs的比例用CD34\CD133\KDR三阳来确定问题还是比较多的，首先就是比例太低了，我看LZ做 ...

无论什么都会有误差，这是没办法避免，但我们可以通过增加获取的细胞数（例如取到10E7或10E8）使误差尽量减少。