提取PBMC计数内皮祖细胞问题多多

chujindong · 发表于 2011-8-24 19:19:13

原来是这样，这样的话图确实比较好看了。不过我还没试过在FSC-SSC散点图设阈值，不知道是怎么设的？

niwanmao · 发表于 2011-8-24 20:52:43

chujindong 发表于 2011-8-24 19:19

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原来是这样，这样的话图确实比较好看了。不过我还没试过在FSC-SSC散点图设阈值，不知道是怎么设的？ ...

其它机器我不知道，CELLQUEST里面有个THRESHOLD菜单，专门用来设置各个通道的阈值。

dragonhzqsmmu · 发表于 2011-8-29 23:41:01

niwanmao 发表于 2011-8-9 17:16

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为什么不自己配呢？我觉得自己配的氯化铵裂解液并不比买来的效果差。配方见：http://www.flowcyto.cn/bbs ...

学习了TZ的氯化铵裂解液的配方，这个是不是就是ACK裂解液，这些相关的试剂是不是一定要买sigma的细胞培养级别的化学试剂，还是国药的分析纯的就OK了？感觉sigma的细胞培养级别的东西是好但成本比较高，因为我是小鼠脾脏裂红后的细胞还要在体外培养刺激treg和th17进行流式细胞检测，多谢

niwanmao · 发表于 2011-8-30 08:17:48

dragonhzqsmmu 发表于 2011-8-29 23:41

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学习了TZ的氯化铵裂解液的配方，这个是不是就是ACK裂解液，这些相关的试剂是不是一定要买sigma的细胞培养 ...

裂红的试剂是只要国产即可，不需要这么高档的。但是裂红后对细胞状态应该还是有点影响的，我们在平时标记免疫表型时，都是抗体孵育完毕之后，再进行裂红。所以不建议裂红后继续培养。
如果你要把红细胞去除之后再培养，我觉得可能还是用一般的PBMC提取方法，或者改用现在有一种比FICOLL更高档的提取PBMC的试剂（叫啥来着？）。提完之后多洗几遍。不过我私下认为继续培养还是有难度的，如果有哪位站友有提取细胞进行继续培养这方面的经验，可开个帖子分享一下，一定高分奖励：）

ganlimi · 发表于 2011-9-27 23:46:41

图漂亮，是因为流式室的老师技术好嘛。

ganlimi · 发表于 2011-9-27 23:47:45

回复 dragonhzqsmmu 的帖子

三阳比例太低太低，不敢做啊。

tree1004 · 发表于 2011-9-29 09:57:27

碎片多是裂解液导致的吧。

sfqiang23 · 发表于 2011-11-22 23:08:52

本帖最后由 sfqiang23 于 2011-11-22 23:09 编辑

孵育抗体时是室温还是4度冰箱中？

sfqiang23 · 发表于 2011-11-22 23:16:22

查阅相关文献做内皮祖细胞的实验，没发现用全血做的啊!
不知能否介绍一篇文献使用全血做的？

niwanmao · 发表于 2011-11-23 08:15:47

sfqiang23 发表于 2011-11-22 23:08

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孵育抗体时是室温还是4度冰箱中？

室温即可。现在有些文章还是会看到4度冰上孵育或者37度孵育，一般说来都没有必要。

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