细胞固定保存问题

haohaoxuexi

srfts 发表于 2022-12-5 16:07
我们之前做过。先Lyse/FIX之后PermIII处理，放-80℃放置。染色的时候直接拿出来全染。我们做的是磷酸化，大 ...

您好，我也用的这俩buffer，固定裂红后全染，表面marker都很异常，CD3几乎全阳，CD8染不上。请问您用的啥抗体？

srfts

haohaoxuexi 发表于 2025-1-8 15:16
您好，我也用的这俩buffer，固定裂红后全染，表面marker都很异常，CD3几乎全阳，CD8染不上。请问您用的啥 ...

就是biolegend的常规抗体，你们固定裂红用的是单独的固定破膜液还是单独破膜固定的

haohaoxuexi

srfts 发表于 2025-1-13 14:05
就是biolegend的常规抗体，你们固定裂红用的是单独的固定破膜液还是单独破膜固定的  ...

用的是BD Phosflow Lyse/Fix Buffer，裂红与固定同时的，然后buffer清洗一遍，再预冷的100%甲醇冰上孵育30分钟。

srfts

haohaoxuexi 发表于 2025-2-24 10:04
用的是BD Phosflow Lyse/Fix Buffer，裂红与固定同时的，然后buffer清洗一遍，再预冷的100%甲醇冰上孵育3 ...

我们裂红固定后还会使用permIII溶液处理后，再冻存保存的 你们试试加上 PD的permIII？

haohaoxuexi

srfts 发表于 2024-4-29 09:11
使用BD的裂红固定液，裂红固定后洗1-2遍，直接perm孵育。

冻存时直接保存在Perm III里吗，还是清洗后换冻存液？

srfts

haohaoxuexi 发表于 2025-3-5 20:26
冻存时直接保存在Perm III里吗，还是清洗后换冻存液？

直接保存在perm里 不换冻存液。。用的时候洗2次直接染色