流式检测表面标记需不需要固定？（在线等）

niwanmao · 发表于 2011-9-14 09:55:06

回复 chujindong 的帖子

我个人的看法是这样的：
低温是为了有利于保持标本和抗体的稳定性，但如果为了结合，从我们以前学过的生化的结合动力学来说，还是需要温度略高一点更有利于结合。

niwanmao · 发表于 2011-9-16 10:58:47

xyzxl 发表于 2011-9-14 09:54

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同问。抗体说明书上说的是4°

说明书是仅供参考。

xyzxl · 发表于 2011-9-16 12:30:18

本帖最后由 xyzxl 于 2011-9-16 12:32 编辑

niwanmao 发表于 2011-9-14 09:55

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我个人的看法是这样的：

哦，那下次改用室温试试！
还有抗体加入之后混匀，孵育30分钟后发现管底能看到沉积的细胞正常吗（细胞密度10^6/100ul）？会不会影响抗原抗体结合呢？

niwanmao · 发表于 2011-9-16 13:32:37

xyzxl 发表于 2011-9-16 12:30

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哦，那下次改用室温试试！
还有抗体加入之后混匀，孵育30分钟后发现管底能看到沉积的细胞正常吗（细胞密 ...

正常。不影响结合。

rogasan · 发表于 2011-12-1 09:15:53

抗原抗体结合会激活补体系统, 导致目标细胞溶解,所以一般要求4度下染色30min即可...

renping_jsnj · 发表于 2012-8-30 15:22:39

rogasan 发表于 2011-12-1 09:15

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抗原抗体结合会激活补体系统, 导致目标细胞溶解,所以一般要求4度下染色30min即可... ...

血清中含补体如C5a，C3a等，所以很多全血或含血清的反应会要考虑补体系统的影响。但是在血清灭活过后，基本认为补体系统的干扰可以排除。因此，rogasan所说的主要是针对在全血中进行染色的情况吧。是不是可以说，做全血染色时放冰上，其他时候室温即可。

niwanmao · 发表于 2012-8-30 15:37:10

renping_jsnj 发表于 2012-8-30 15:22

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血清中含补体如C5a，C3a等，所以很多全血或含血清的反应会要考虑补体系统的影响。但是在血清灭活过后，基 ...

这个抗体孵育的温度室温、4℃都有说法，我平时是用室温的。

rogasan · 发表于 2012-9-14 11:49:30

renping_jsnj 发表于 2012-8-30 15:22

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血清中含补体如C5a，C3a等，所以很多全血或含血清的反应会要考虑补体系统的影响。但是在血清灭活过后，基 ...

基本可以这么理解, 我们都是这么做的, 暂时没出过问题.....

niwanmao · 发表于 2012-9-14 12:01:11

rogasan 发表于 2012-9-14 11:49

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基本可以这么理解, 我们都是这么做的, 暂时没出过问题.....

在2007年国际临床和实验室标准化协会制定的“血液淋巴细胞肿瘤细胞的临床流式分析指南”中，特地指出了标本处理过程的标准化，染色条件就是室温（18～22℃），避光，见2008年刘艳荣教授他们小组翻译的指南第5页：http://www.flowcyto.cn/bbs/reade ... MO1Q8f0rHO4YMQWht3I

当然，有的时候4℃可能大多数情况下没问题，但是既然标准化的东西在那里，我们还是应该遵循。

huzengwu · 发表于 2012-9-14 23:02:27

昨天在一个地方做实验，由于不知道那个离心机怎么调整速度，又找不到管这个离心机的老师，只能将就着用原来设置的2500RPM，结果也可以。

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