流式检测表面标记需不需要固定？（在线等）

穿越地平线

建议抗体孵育时只要常温避光孵育即可，不要放冰上。为啥，本人也是不懂，因为之前孵育抗体时一直是放在4°冰库而且是冰上。

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1. 各个离心机之间g是通用的，一般300-400g离心5分钟，各个离心机的半径不同，如果是转速rpm的话需要换算。

2. 说明书推荐用4°应该是考虑低温减少非特异性结合，但现在一般都是单克隆抗体，一般室温也没什么问题。一般孵育抗体都不推荐用血清的buffer，我见过书上是说补体反应会影响荧光信号，不是前面同学说的导致细胞裂解。我们做分选推荐孵育buffer都是0.5%BSA的PBS溶液。