人外周血测th17细胞结果分析

rogasan

CD4配FITC肯定没问题, 不过倒是可能你的破膜过程不适当....

下面是我们刚做出来的图

chujindong

rogasan 发表于 2011-12-1 19:19

                               
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CD4配FITC肯定没问题, 不过倒是可能你的破膜过程不适当....

下面是我们刚做出来的图 ...

你跟楼主的情况是不一样的，不能混谈。楼主的细胞是要经过刺激的，这时CD4会被刺激剂下调，所以在流式图上的分界很不明显。而你是做TREG，细胞是不需要任何处理的，对CD4没有影响，所以你的分群很明显。

rogasan

chujindong 发表于 2011-12-6 18:08

                               
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你跟楼主的情况是不一样的，不能混谈。楼主的细胞是要经过刺激的，这时CD4会被刺激剂下调，所以在流式图 ...

这时的CD4可以用CD3+CD8-来设门.....

chujindong

rogasan 发表于 2011-12-6 19:13

                               
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这时的CD4可以用CD3+CD8-来设门.....

用CD4并没有错，而且肯定能做出来，只是楼主用的刺激剂浓度可能大了，或者孵育时间长了。现在一般都用CD3+CD8-来代替，虽然这个最好，但是抗体又得重新买了。

haven_t

chujindong 发表于 2011-12-6 20:01

                               
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用CD4并没有错，而且肯定能做出来，只是楼主用的刺激剂浓度可能大了，或者孵育时间长了。现在一般都用CD3 ...

有些kit买回来就是三标的CD3 CD4 IL17，都混合到一起，没法更换。

renping_jsnj

刺激过后CD4 的表达是有明显下调的。我做的是PMA/ionomycin刺激4h的结果，就可以看到刺激之后的CD4表达下调。但总归还是能分群的。注意要在固定和透膜之前标记表面marker。