胞内标记染色讨论

niwanmao · 发表于 2012-1-9 20:41:14

dragonhzqsmmu 发表于 2012-1-9 20:24

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学习了，感觉胞内染色问题很多，细胞丢失和变形很厉害，管理员用的都是BD的试剂？有没有相关的货号？我们用 ...

以前用的是caltag的fix & perm，细胞物理参数和荧光变化比较大，但是结果还算稳定，而且步骤简单，后来由于招标时医院按照价格来，所以用了bd的perm2，感觉不好。现在用biolegend的foxp3破膜剂（本身是做核内标记的）做胞内标记，刚开始自己摸条件是觉得还比较稳定，但是最近让手下去做了几个，发现结果不理想，我准备自己再做几个看看，问题究竟出在哪里。

dragonhzqsmmu · 发表于 2012-1-16 12:22:26

biolegend的试剂比BD要便宜不少，成本能降低不少的

niwanmao · 发表于 2012-1-16 12:32:57

最近这段时间我们这边处理标本的同学用FOXP3的破膜剂来做胞内标记经常出问题（例如正常粒细胞上MPO表达阴性），用BD的Perm2就能够做出来，我在旁边看了半天，步骤、试剂配制都没问题啊，后来仔细一看，晕，原来是foxp3的破膜剂kit试剂过期了。

所以这里提醒大家一下：BIOLEGEND的FOXP3破膜剂的有效期似乎很短，大概只有半年－1年左右，很容易过期，过期之后，效果就明显不行了。

luxj807 · 发表于 2012-3-31 18:34:31

我做全血，不固定，表面染色，溶血，破膜，胞内因子染色，用的就是BD的溶血剂和破膜剂，
麻烦的就是刺激效果不稳定。

luxj807 · 发表于 2012-3-31 18:36:30

老师，您好，请问在哪个厂家买的cCD3呢？谢谢。

niwanmao · 发表于 2012-3-31 19:58:12

luxj807 发表于 2012-03-31 18:36:30

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老师，您好，请问在哪个厂家买的cCD3呢？谢谢。

bd is的

oky · 发表于 2012-8-14 11:29:41

倪老师你好！我想知道你破膜后，CD45的强度减弱吗？我们做的破膜后总是出现CD45强度减弱，分析时破膜后的要用另一模版分析。

niwanmao · 发表于 2012-8-14 13:17:23

oky 发表于 2012-08-14 11:29:41

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倪老师你好！我想知道你破膜后，CD45的强度减弱吗？我们做的破膜后总是出现CD45强度减弱，分析时破膜后的要

CD45是会降低的，好的破膜剂减弱程度轻一点。不单单45，fsc、ssc也都会有所改变

renping_jsnj · 发表于 2012-8-15 11:33:18

我做CD4/CD45/IL-17/IFNg的染色。
用的固定和透膜都是eBioscience的：IC Fixation Buffer，Cat：00-8222；Permeabilization Buffer，Cat：00-8333。
结果：
对CD45/CD4无明显影响，分群分的很好。
胞内染色的结果也挺好的，有不大好的时候，个人认为更多的是细胞消化、刺激等环节的问题。
对FSC、SSC，因为做的是爪子消化下来的细胞，本身没有明确的分群，所以不知道有无影响。
总体感觉还可以，推荐下。

niwanmao · 发表于 2012-8-15 12:21:42

renping_jsnj 发表于 2012-8-15 11:33

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我做CD4/CD45/IL-17/IFNg的染色。
用的固定和透膜都是eBioscience的：IC Fixation Buffer，Cat：00-8222；P ...

感谢推荐。
不知道是不是有试用装，啥时候找点试试看：）

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