胞内标记染色讨论

oky

我们用的是BD的破膜剂，没用过其他家的，请问倪老师：哪家破膜剂最好用？

hmily

有试过使用BD，Coulter和Caltag及Foxp3的破膜剂，个人觉得BD的由于没有固定剂成分，基本一管下来FS，SS变小，和表面的都不能用同一个位置分析，CD45也都会偏弱，Coulter和Caltag的步骤基本一致，感觉用这两个破膜剂的话细胞变形没BD和Foxp3的那么厉害，但有时抗体表达好像有点弱；Foxp3的染色都可以染上，但是细胞变形也很厉害啊，FS和SS的三群都很难看，估计是破膜剂太厉害了。不过做细胞因子的用FOXP3的破膜剂效果好一点。

niwanmao

oky 发表于 2012-8-15 21:40

                               
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我们用的是BD的破膜剂，没用过其他家的，请问倪老师：哪家破膜剂最好用？ ...

除了BD的破膜剂，我只用过CALTAG的（现在已被invitrogen收购）fix & Perm，也会影响FSC和SSC，但相对BD的来说影响较小一点。

oky

谢谢！但我们单位换不同家的试剂烦琐一点！

oky

倪老师：你好！我们想做胞浆CD3，做几次都不成功，用的是BD公司的CD3-FITC、破膜剂，做cMPO/cCD79/cTDT很成功，不知你们用的哪家的破膜剂，CD3用的哪种颜色的？

niwanmao

oky 发表于 2012-11-21 20:14

                               
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倪老师：你好！我们想做胞浆CD3，做几次都不成功，用的是BD公司的CD3-FITC、破膜剂，做cMPO/cCD79/cTDT很成 ...

FITC本来就不太强，做胞内可能更难做。象我们平常做表面标记时用BD的CD33 FITC和CD19 FITC都不是很强。CD3我们用的是APC的标记。破膜做的还不错，经常在一些cortical T-ALL中sCD3阴性，而cCD3能做出高表达。

kobe327292007

老师，我最近做胞内IFN-γ检测，做好之后，从我这里到做流式的地方，大约需要2小时，我是用PBS还是用多聚甲醛溶液来保存细胞啊？》

niwanmao

kobe327292007 发表于 2013-9-29 19:42

                               
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老师，我最近做胞内IFN-γ检测，做好之后，从我这里到做流式的地方，大约需要2小时，我是用PBS还是用多聚甲 ...

我倒没试过，不过觉得固定一下保险吧。

谱一首幸福

niwanmao 发表于 2011-12-12 10:53
最近这一个月用foxp3的破膜剂来做胞内标记，条件基本上稳定下来了，效果确实不错，在CD45－SSC图上，所有的 ...

倪老师，抗体染色不是需要4度1h么？表面抗体孵育15min够不够呀？

loisen

谱一首幸福 发表于 2017-12-5 11:01
倪老师，抗体染色不是需要4度1h么？表面抗体孵育15min够不够呀？

一般表面抗体孵育10-15min，4度。胞内的抗体时间在30min作用差不多。