foxp3破膜剂用于胞内标记染色的尝试

alina1123 · 发表于 2012-8-27 19:46:44

请问倪老师，FOXP3 Fix/Perm Bufer Set (Cat. No. 421403) 配成1X的溶液后可以保存多久呢？用每次现用现配吗？染TdT和染Foxp3一样吧？

niwanmao · 发表于 2012-8-27 20:00:53

alina1123 发表于 2012-8-27 19:46

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请问倪老师，FOXP3 Fix/Perm Bufer Set (Cat. No. 421403) 配成1X的溶液后可以保存多久呢？用每次现用现配 ...

TdT是胞内的，用普通的破膜剂即可。
我一般都是按照需要多少就配多少，他们说明书上好象也没说工作液能保存多久，我平时最长1个星期是保存过的。

samly0 · 发表于 2012-8-29 23:02:11

我印象中foxp3是在细胞核内的，所以foxp3用普通的破膜剂染不上，需要用专门染foxp3的破膜剂，就向楼主说的FOXP3 Fix/Perm Bufer Set ，TDT在核外的胞浆细胞器中，像这种因子用普通的破膜剂就可以。理论上用foxp3的专用破膜剂应该也可以染上，不过我没试过，因为foxp3的专用破膜剂比普通破膜剂成本高，呵呵。

niwanmao · 发表于 2012-8-29 23:38:48

samly0 发表于 2012-8-29 23:02

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我印象中foxp3是在细胞核内的，所以foxp3用普通的破膜剂染不上，需要用专门染foxp3的破膜剂，就向楼主说的F ...

是的，位置不同的。因为之前用普通破膜剂做胞内效果不佳，所以产生了前述想法，效果还过得去，但是对表面标记的荧光、SSC等指标影响太大。

alina1123 · 发表于 2012-9-13 08:29:07

倪老师，我试了用这个方法染了TDT，但是效果不是很好，不知道为什么，CD45的表达变的很弱。

niwanmao · 发表于 2012-9-13 09:17:31

alina1123 发表于 2012-9-13 08:29:07

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倪老师，我试了用这个方法染了TDT，但是效果不是很好，不知道为什么，CD45的表达变的很弱。

破膜剂对表面标记的影响都有，只是明显不明显而已。biolegend比较明显，最近试了下ebioscience的，发现表面标记变化小一点，但是ssc分得不好，继续验证中………

liuxin · 发表于 2012-11-21 18:57:59

本帖最后由 liuxin 于 2012-11-21 19:00 编辑

谈谈我的心得吧，大家说的应该是Human Blood的吧@niwanmao @chujindong@samly0 @alina1123 ，要是做鼠的话，我用过ebioscience的，效果不错。

niwanmao · 发表于 2012-11-21 19:58:38

liuxin 发表于 2012-11-21 18:57

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谈谈我的心得吧，大家说的应该是Human Blood的吧@niwanmao @chujindong@samly0 @alina1123 ，要是做鼠的话 ...

我们做的是人的骨髓居多，外周血其次。如果目标细胞比例低（如低于5％），往往biolegend和eBioscience的核内破膜剂处理后FSC、SSC均分不清，这时通常需要借助一些特异性的表面标记来帮助区分。

liuxin · 发表于 2012-11-22 23:16:04

niwanmao 发表于 2012-11-21 19:58

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我们做的是人的骨髓居多，外周血其次。如果目标细胞比例低（如低于5％），往往biolegend和eBioscience的 ...

恩，我确实发现用ebioscience的破膜剂处理之后的组织标本的FSC、SSC分群不清，我一直以为是Ficoll、Percoll或者是处理的问题呢。

yuemin5 · 发表于 2013-4-11 11:39:15

突然想到一个问题。在做白血病胞内染色的时候我们可以用粒细胞的MPO或者淋巴的cCD3来作为内部对照判断胞内染色处理的正确性。但是在科研中，如果我们针对的是一个肿瘤细胞株，我们想知道其中一个胞内蛋白的表达，那么如何能找到一个类似于MPO这样的内参。就相当于housekeeping gene在PCR中的作用。

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