foxp3破膜剂用于胞内标记染色的尝试

niwanmao · 发表于 2013-4-11 12:43:09

yuemin5 发表于 2013-04-11 11:39:15

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突然想到一个问题。在做白血病胞内染色的时候我们可以用粒细胞的MPO或者淋巴的cCD3来作为内部对照判断胞内

用FMO对照

niwanmao · 发表于 2013-4-12 11:48:46

yuemin5 发表于 2013-4-11 11:39

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突然想到一个问题。在做白血病胞内染色的时候我们可以用粒细胞的MPO或者淋巴的cCD3来作为内部对照判断胞内 ...

你的意思是作为判断染色的阳性对照？
如果是未知的蛋白，那么只能通过控制自己的正确操作来保证正确性，如果错误了，没办法。

yuemin5 · 发表于 2013-4-12 12:01:15

niwanmao 发表于 2013-4-12 11:48

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你的意思是作为判断染色的阳性对照？
如果是未知的蛋白，那么只能通过控制自己的正确操作来保证正确性， ...

我的意思是有一个已知是阳性的蛋白做质控。这样如果做出来这个已知蛋白和我要研究的未知蛋白同时阴性的话，我就可以知道是我破膜和/或染色过程有问题。不知道我有没有表述清楚。

niwanmao · 发表于 2013-4-12 12:22:32

yuemin5 发表于 2013-4-12 12:01

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我的意思是有一个已知是阳性的蛋白做质控。这样如果做出来这个已知蛋白和我要研究的未知蛋白同时阴性的话 ...

我明白，就是想有个阳性对照，可以了解染色过程是否有问题，或抗体质量是否有问题，但只有你已经知道哪个细胞肯定表达该蛋白。如果在未知的场景下没办法，只能通过控制方法来保证实验结果的正确性和可重复性。

kobe327292007 · 发表于 2013-7-2 08:01:27

本帖最后由 kobe327292007 于 2013-7-2 08:04 编辑

biolegend的foxp3破膜剂kit可以做IFN-γ么？或者有没有其他的推荐用来做IFN-γ的破膜+固定？

niwanmao · 发表于 2013-7-2 09:20:05

kobe327292007 发表于 2013-7-2 08:01

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biolegend的foxp3破膜剂kit可以做IFN-γ么？或者有没有其他的推荐用来做IFN-γ的破膜+固定？ ...

从理论上说，应该是可以的。还是得试了再说。

kobe327292007 · 发表于 2013-7-2 09:25:35

niwanmao 发表于 2013-7-2 09:20

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从理论上说，应该是可以的。还是得试了再说。

我看了下，貌似老师你用过这个。

niwanmao · 发表于 2013-7-2 09:57:59

kobe327292007 发表于 2013-7-2 09:25

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我看了下，貌似老师你用过这个。

是的，刚开始做的时候用这个，后来被invitrogen收购了就没用过了。不知道后来的质量是否变了

kobe327292007 · 发表于 2013-7-2 10:02:32

niwanmao 发表于 2013-7-2 09:57

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是的，刚开始做的时候用这个，后来被invitrogen收购了就没用过了。不知道后来的质量是否变了 ...

没事，我买了试试，好用的话我给你在这里反馈。最近要做的实验挺多的，比如检测NK细胞的IFN-γ，流式检测NK的杀伤，以及NK亚型和表面标志的分析，呵呵，现在正在学习，明天各种抗体根据做流式的老师的指导下购买，估计一个月内就能出来结果了。到时候把这方面的资料汇总下回馈论坛。

谢谢你，倪老师。

liaoyanchun · 发表于 2013-7-4 16:56:22

niwanmao 发表于 2012-6-26 10:49

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你是不是指两个组分，那都要用的。只要稀释到1×的工作液就行了。
我在用的是biolegend的foxP3破膜剂，4× ...

我最近也在做foxp3 ,可是只用了perm破膜剂,而没有用破核膜的,染出来只有4-5%

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