Annexin V-PE和7-AAD双染凋亡数据分析，求帮忙

niwanmao

PompyJohn 发表于 2011-12-19 11:04

                               
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我还想问一下倪老师，在FSC-SSC图中，最先从左下角出来的应该是细胞还是非特异信号或碎片？ ...

PK15细胞（http://www.atcc.org/ATCCAdvanced ... emplate=cellBiology），从描述来看，应该属于肾脏细胞，个头应该不会小到这个地步，那么我估计你处理过程中细胞都碎了。我建议你在上机之前在显微镜下观察一下，如果能保证机器硬件运行正常，我可以肯定都是碎片或者看不到细胞。

PompyJohn

haven_t 发表于 2011-12-19 12:38

                               
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FCS express无法识别数据文件中的补偿矩阵，所以要手动设置。记下机器补偿，然后在fcs express上调节吧 ...

哦，这样啊，下次试试，谢谢了

PompyJohn

niwanmao 发表于 2011-12-19 12:43

                               
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PK15细胞（http://www.atcc.org/ATCCAdvancedCatalogSearch/ProductDetails/tabid/452/Default.aspx?ATCC ...

倪老师，PK15是猪的肾脏上皮细胞，我消化后，显微镜下观察了，绝大部分细胞都是圆形，未碎裂，这个问题也很令我困惑

niwanmao

PompyJohn 发表于 2011-12-19 14:39

                               
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倪老师，PK15是猪的肾脏上皮细胞，我消化后，显微镜下观察了，绝大部分细胞都是圆形，未碎裂，这个问题也 ...

不是说你现在观察，我的意思是希望你染色完成之后，准备上流式检测了，这个时候到显微镜下观察。
上次在我这儿做的那个研究生，刚开始他的细胞状态也都很好的，结果细胞周期处理时的A液一加进去，马上细胞全没了。

PompyJohn

niwanmao 发表于 2011-12-19 15:27

                               
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不是说你现在观察，我的意思是希望你染色完成之后，准备上流式检测了，这个时候到显微镜下观察。
上次在 ...

倪老师的意思是染色液能导致细胞碎裂？那样的话实验不就没法做了吗？而且我的未染色的细胞也是这个样子，这就排除了染色液的问题，还有根据什么指标判断颗粒的大小（小于什么标准就不是细胞）？请指点

niwanmao

PompyJohn 发表于 2011-12-19 15:38

                               
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倪老师的意思是染色液能导致细胞碎裂？那样的话实验不就没法做了吗？而且我的未染色的细胞也是这个样子， ...

因为你的细胞在平时的状态是好的，所以我是希望你在每一步处理之后都取一小滴观察一下细胞形态，看看哪一步出了问题，不能排除某个组分对它有影响，造成细胞破坏（因为从你的FSC-SSC图看，实在不象正常细胞）。
判断是否碎片，首先得知道一个正常情况下取细胞的电压，在此电压下，如果某群信号在左下方缩成一小团，并且你调节电压它都出不来或者出来很不明显，这就得考虑碎片的可能性了。

PompyJohn

niwanmao 发表于 2011-12-19 21:43

                               
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因为你的细胞在平时的状态是好的，所以我是希望你在每一步处理之后都取一小滴观察一下细胞形态，看看哪一 ...

倪老师，我今天又做了一次，上样未染色的细胞，这次在FSC-SSC线性图中细胞群倒是很明显，我设门后，在FL2-FL3双参数log点图中，除了左下象限的一群细胞（我设门发现此群细胞数目大约是FSC-SSC门中细胞数目的十分之一）外，最左下角还堆积了一群细胞，电压调到很大也不出来，请您指点这是什么原因？

niwanmao

PompyJohn 发表于 2011-12-20 17:50

                               
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倪老师，我今天又做了一次，上样未染色的细胞，这次在FSC-SSC线性图中细胞群倒是很明显，我设门后，在FL2 ...

能否把原始数据文件传上来？

PompyJohn

niwanmao 发表于 2011-12-20 21:24

                               
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能否把原始数据文件传上来？

不好意思，今天的原始数据没拷下来，倪老师我描述的哪里不清楚吗

niwanmao

PompyJohn 发表于 2011-12-20 21:32

                               
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不好意思，今天的原始数据没拷下来，倪老师我描述的哪里不清楚吗

流式最好看图或对原始数据亲自分析，每个人描述有每个人不同的看法，不准确。你所说的FSC－SSC细胞群很明显，到了FL2/FL3上又出不来，我就有点理解不了。如果真的调节电压都出不来，那么这堆就不是细胞，不应该在FSC-SSC上出现。