有用CD3，CD4，CD25做封闭抗体吗？有的话麻烦分析图上来，急

niwanmao

evadj86 发表于 2014-6-11 13:41
请教一下老师，文中提到“1 小时内分离血清，并灭活补体”，灭活补体的意义何在？如何灭活补体？谢谢。 ...

这个项目我们没做过，我估计是在后面那一步血清和配偶细胞孵育时，防止补体对细胞毒作用的增强吧。
至于灭活补体，似乎跟普通培养的血清灭活差不多吧，似乎是加热56℃热灭活，30分钟

evadj86

我还想弱弱的问一句，对照管中再加入丈夫本人血清或正常男性AB型血清50μl，对照管“丈夫肝素抗凝外周血+丈夫本人血清”和”丈夫肝素抗凝外周血+正常男性AB型血清“有什么区别？为什么要加入丈夫本人血清或正常男性AB型血清？谢谢。

niwanmao

evadj86 发表于 2014-6-26 15:06
我还想弱弱的问一句，对照管中再加入丈夫本人血清或正常男性AB型血清50μl，对照管“丈夫肝素抗凝外周血+丈 ...

这其实属于一种条件的对照，实验管和对照管用的都是丈夫的抗凝血，但实验管加入的是妻子的血清，而对照管用丈夫自身的血清或正常男性AB型血清（这种血清肯定没有针对丈夫外周血的抗体）。

evadj86

niwanmao 发表于 2014-6-26 21:42
这其实属于一种条件的对照，实验管和对照管用的都是丈夫的抗凝血，但实验管加入的是妻子的血清，而对照管 ...

选用正常男性“AB型”血清，选AB型是因为此种血清中无抗A、抗B？

niwanmao

evadj86 发表于 2014-06-27 08:46:40

                               
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选用正常男性“AB型”血清，选AB型是因为此种血清中无抗A、抗B？

是的

evadj86

niwanmao 发表于 2014-6-27 12:18
是的

多谢倪老师 ^_^

evadj86

不好意思，关于这个检测我还有疑问，1、文献上提到封闭效率小于0提示封闭抗体缺乏，但是，我理解的是，如果妻子有封闭抗体，对照管-测定管肯定是大于零，那如果没有封闭抗体，难道不是等于0吗？另外，2、对照管加入丈夫自身的血清或正常男性AB型血清，和不加入这些血清，结果一样吗？

niwanmao

evadj86 发表于 2014-7-2 15:09
不好意思，关于这个检测我还有疑问，1、文献上提到封闭效率小于0提示封闭抗体缺乏，但是，我理解的是，如果 ...

这个封闭抗体呢我也是没有做过，但对于理论的理解我有点不同。

当妻子有封闭抗体时，可封闭丈夫的淋巴细胞相关位点，防止其活化，此时对照管－测定管肯定是大于0；

但是当妻子封闭抗体缺乏时，无法封闭相关位点，妻子的血清加入后就是一种异种蛋白刺激原，可能会导致淋巴细胞活化（因为没有封闭抗体的抑制），所以相关抗原表达率一般都会增高，于是对照管－测定管会出现负值。当然，并不是每一种抗原都会表达增高，所以正值也可以的。

至于对照管加入丈夫自身血清或正常男性AB血清，我觉得只是在刺激因素上做个对照。

evadj86

niwanmao 发表于 2014-7-2 20:18
这个封闭抗体呢我也是没有做过，但对于理论的理解我有点不同。

当妻子有封闭抗体时，可封闭丈夫的淋巴细 ...

多谢倪老师讲解！这个是不是和补体依赖性淋巴细胞毒试验（CDC）交叉配型实验有点像？操作时先将血清和外周血孵育后再加抗体会不会更合理？

niwanmao

evadj86 发表于 2014-07-03 13:30:29

                               
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多谢倪老师讲解！这个是不是和补体依赖性淋巴细胞毒试验（CDC）交叉配型实验有点像？操作时先将血清和外

有可能吧。在这两样实验上，我也只是理论家