大家如有细胞分选的问题可以在此提问

CRP

olivezhou0716 发表于 2012-7-9 18:17

                               
登录/注册后可看大图

不好意思，上午有个会，没能及时回复您。
您用的什么组织？细胞计数的单细胞悬液状态和细胞活率怎么样？分 ...

我分选的是C57bl/6小鼠的脾脏的Naive CD4+CD62L细胞，细胞状态没有问题，我先是通过ficol获得淋巴细胞，然后再按照说明书做的，就比例说，先是去除分选得到CD4，细胞还是很多的，但是最后一步阳选CD62的时候就很少了，这一步不是要推着把磁珠上的细胞弄下来，我老觉的这样做的不合适，但也不知道你们一般是怎么弄的。
O(∩_∩)O谢谢您了！

olivezhou0716

CRP 发表于 2012-7-11 11:33

                               
登录/注册后可看大图

我分选的是C57bl/6小鼠的脾脏的Naive CD4+CD62L细胞，细胞状态没有问题，我先是通过ficol获得淋巴细胞， ...

您的小鼠是正常小鼠还是疾病小鼠？做分选前有没有留一部分细胞流式看一下naive CD4 T的比例？是否小鼠状态也影响了细胞的比例？
细胞用所配的plunger推下来是为了让目的细胞从柱子上洗脱的更完全，我们都是这样做的，您是让细胞通过重力流下还是推下来的？
我给您发了短信，方便的时候我可以打电话给您

CRP

olivezhou0716 发表于 2012-7-11 17:24

                               
登录/注册后可看大图

您的小鼠是正常小鼠还是疾病小鼠？做分选前有没有留一部分细胞流式看一下naive CD4 T的比例？是否小鼠状 ...

thanks  da bu liao han zi

qqgirl119

你好，我的实验是分离大鼠的CXCR4+/-的骨髓细胞，我应该需要anti-rat-CXCR4-PE抗体和抗PE的磁珠。可是所有的公司的流式anti-rat-CXCR4-PE抗体都只是人和小鼠的，我可以用吗？这个抗体必须是用于流式的吗？有没有什么别的办法可以分离细胞，郁闷了一个多月了，请指导。谢谢了

niwanmao

qqgirl119 发表于 2012-08-17 17:07:18

                               
登录/注册后可看大图

你好，我的实验是分离大鼠的CXCR4+/-的骨髓细胞，我应该需要anti-rat-CXCR4-PE抗体和抗PE的磁珠。可是所有

从原理上来说是可以的，因为抗pe磁珠只是针对pe这个染料，跟用于什么用途无关。

dreamgirllong

倪老师，您好！我是用流式分选的细胞，然后培养。每次细胞在24小时后就死的差不多了。不知道要怎样才能提高细胞的活性。
我们的大致步骤是：
1、淋巴细胞分离液分离外周血的单个核细胞。
2、室温抗体孵育20min
3、上机flow rate 设置为1或2（怕快了对细胞损伤比较大，您的意见呢），每次分选的时间在30-60min（您觉得会不会太长）。之前鞘液都是用的生理盐水，工程师建议改用PBS，这个下次我们就改用这个。
4、在整个过程，我需要在间歇期把细胞至于冰上吗，还是说室温比较好。

niwanmao

dreamgirllong 发表于 2012-8-25 13:43

                               
登录/注册后可看大图

倪老师，您好！我是用流式分选的细胞，然后培养。每次细胞在24小时后就死的差不多了。不知道要怎样才能提高 ...

能否先把这个话题另外开个提问帖，这样大家讨论起来比较有针对性。这个帖子是专门问磁珠分选的。

tree1004

分选的磁珠用量，其实最好还是根据说明书建议用量建立梯度，自己验证最佳的用量，这样才能保证实验结果，又可以节约试剂盒。

可可菲

我想咨询下 一只小鼠的脾脏单细胞悬液用磁珠分选能分出多少CD4+T细胞啊？

samly0

大概10的6至7次方