大家如有细胞分选的问题可以在此提问

samly0

hbezyr 发表于 2013-5-22 15:53

                               
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你好。我这边有autoMACS仪器。我想知道这个仪器是不是一次只能分选出一种阳性的细胞？
比如，我想从PBMC中 ...

是需要分三次分离。以前我的导师很给力，为了让我们磁珠分选的效率更快，自己做了一块磁铁，上面有两个凹槽，可以同时放两根柱子，所以我可以在同一磁场同时分选CD4+ 、CD8+T细胞，上完后拿去测纯度，跟用商品化的磁铁一样。柱子也想自己做，但是尝试过后就放弃了，这个需要很高的技术含量。

samly0

samly0 发表于 2013-5-23 09:11

                               
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是需要分三次分离。以前我的导师很给力，为了让我们磁珠分选的效率更快，自己做了一块磁铁，上面有两个凹 ...

牛的是导师，望尘莫及

niwanmao

samly0 发表于 2013-5-23 09:30

                               
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牛的是导师，望尘莫及

好的东西还是会有遗传的

olivezhou0716

嗯，没错，要三次的。建议去除分选先分CD8，再去除分选CD4，最后再分gamma-delta T
@hbezyr   

63735523

我们实验室用人的PBMCS做naiveCD4+T磁珠分选，用的是阴性分选，美天妮的，但是得到纯度太低，只有65%。技术上严格按照说明书来的，磁珠是不是有问题啊。

olivezhou0716

请将相关的数据和操作步骤发到我邮箱，我们分析一下。目前还未遇到几个磁珠出问题导致的结果不好。磁珠的保存只要是冷藏在冰箱，每次用后快速放回冰箱，一般问题不大的

liliqianyi

周老师，您好！我在做小鼠treg的磁珠分选和培养扩增，用的分别是美天旎的regulatory T cell Isolation kit 和 treg expansion kit。
分选的话，做了很久，但纯度不太稳定，按照说明书的量有时候纯度也就70%。
对于其中的离心速度和时间，300g，10min，是否可以调为1500rpm，5min

另外，试剂盒的价格还是挺贵的，不知道是否可以调整抗体的量，节约一点。

谢谢老师了！！！

liliqianyi

liliqianyi 发表于 2013-11-4 22:39

                               
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周老师，您好！我在做小鼠treg的磁珠分选和培养扩增，用的分别是美天旎的regulatory T cell Isolation kit  ...

怎么没有人回复呢

olivezhou0716

liliqianyi 发表于 2013-11-4 22:39
周老师，您好！我在做小鼠treg的磁珠分选和培养扩增，用的分别是美天旎的regulatory T cell Isolation kit  ...

不好意思，最近比较忙都没有上网站。
关于你提到的纯度的问题，涉及到很多细节。建议每次做实验之后收集两个步骤的细胞流式看一下是哪一步的纯度有问题。比如第一步CD4的分选，因为是去除分选，柱子的选择很关键，理论上LS的最大滞留量是10e8，阳性选择按照这个量上柱是没问题的，但如果做去除分选，往往去的不是特别干净，所以当细胞数比较多的时候一定要慎重选择分选柱。
另外，第二步的分选也有一个细节需要注意的：CD25的抗体和磁珠量是按照起始的脾脏细胞总数（不是分到的CD4+T细胞的数量)来加入，如果加少了纯度肯定也受影响。
目前你的实验结果不是特别好，建议先别降低磁珠和抗体量，等调到90%以上了，可以试着降低。
你也可以联系美天旎所在区域的技术支持，一定可以得到更及时和周到的服务！

liliqianyi

olivezhou0716 发表于 2013-12-19 11:55
不好意思，最近比较忙都没有上网站。
关于你提到的纯度的问题，涉及到很多细节。建议每次做实验之后收集 ...

嗯 好的  谢谢  关于说明书上说的阴选用LD柱  用LS柱有差别吗（没有LD柱了）？
另外我的第一步阴选，是根据细胞数换了柱子的，CD4分的纯度也不高，一般能分多高？