大家如有细胞分选的问题可以在此提问

liliqianyi

olivezhou0716 发表于 2013-12-19 11:55
不好意思，最近比较忙都没有上网站。
关于你提到的纯度的问题，涉及到很多细节。建议每次做实验之后收集 ...

还有一点  我的试剂盒 cd25是阳选
阳选这步抗体，我的理解是，少加一点更容易保证纯度，但是会降低细胞得率。
这样理解可以吗？还请您多指导！

olivezhou0716

liliqianyi 发表于 2013-12-19 19:11
还有一点  我的试剂盒 cd25是阳选
阳选这步抗体，我的理解是，少加一点更容易保证纯度，但是会降低细胞得 ...

这个不是很准确。如果量加少了，每个细胞上的抗体结合量都低，CD25本来就表达较弱，这样很多阳性细胞挂不住，阴性跟阳性的差异不大，非特异性的结合就增加了，这样纯度也会下降

olivezhou0716

liliqianyi 发表于 2013-12-19 18:20
嗯 好的  谢谢  关于说明书上说的阴选用LD柱  用LS柱有差别吗（没有LD柱了）？
另外我的第一步阴选，是根 ...

Ls和LD柱有差别的。LD的去除能力比较强，如果去除表达比较弱的细胞最好用这个柱子，用这个柱子做的话细胞的损失会比较多；Ls的结合能力相对差一些，对于普通表达强度的细胞的去除是没有问题的，但当细胞数比较多时（即使不超过柱子的最大滞留量），也可能会有相当多的细胞没有充分结合到柱子上，导致纯度下降。这种情况下建议：1，可以用多个LS柱子；2，可以用LD柱。
正常人外周血分选用CD4的kit做一般纯度可以做到95%以上的，这种情况是考虑到所有的因素都是没有问题的。如果：细胞数太多、病人样本（部分病人样本的CD4比例明显下降就会影响到纯度）、磁珠和抗体量等都会影响到纯度。

liliqianyi

olivezhou0716 发表于 2013-12-23 14:53
这个不是很准确。如果量加少了，每个细胞上的抗体结合量都低，CD25本来就表达较弱，这样很多阳性细胞挂不 ...

嗯  说的很对！    抗原抗体的结合果然是门高深的学问！

liliqianyi

olivezhou0716 发表于 2013-12-23 15:10
Ls和LD柱有差别的。LD的去除能力比较强，如果去除表达比较弱的细胞最好用这个柱子，用这个柱子做的话细胞 ...

嗯  谢谢您的回复！  
想追问一句，小鼠CD4+CD25+ regulatory T cell isolation kit里面阴选第一步去除非CD4+T cell的过程，和单独CD4+T cell isolation kit里去除非CD4+T cell的过程有什么差别呢？
二者用的柱子不一样，前者要求LD柱，后者要求LS柱，而后者非CD4 cocktail的抗体种类更多一些，单独CD4+T cell isolation kit获得的CD4T 纯度更好吗？为什么的后者的设计不用LD柱呢？
谢谢!问的有些繁琐，请您有空的时候多指导！

olivezhou0716

liliqianyi 发表于 2013-12-23 22:51
嗯  谢谢您的回复！  
想追问一句，小鼠CD4+CD25+ regulatory T cell isolation kit里面阴选第一步去除非 ...

不好意思回复晚了。

技术上没有本质差别，都是去除分选。
因为Treg比例较低，为了达到较好的纯度，会用比较多的起始细胞，LS在细胞很多的时候就不是很合适。单纯的CD4 T分选一般不需要那么多细胞，LS也就够了。

相对来说CD4+T cell isolation kit II经过了update，纯度会更好些，但差别不大。