调节性T细胞（Treg）检测的设门步骤

luqhcolalove

我最近也在做FOXP3发现都是阴性，换了二家公司破膜剂，都不行，有没有可靠的破膜剂，推荐一下？

niwanmao

luqhcolalove 发表于 2012-11-12 12:21

                               
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我最近也在做FOXP3发现都是阴性，换了二家公司破膜剂，都不行，有没有可靠的破膜剂，推荐一下？ ...

我做过ebioscience和BD的，不过都是研究生自己处理的标本，ebioscience是有时候可以看到稀稀拉拉几个。我在想，是不是Treg也需要什么刺激一下？

judy006

Treg不需要刺激的，固定破膜剂现用现配注意一下

ybz

niwanmao 发表于 2012-10-6 20:51
你难道没有用foxp3的破膜剂？那肯定更加做不出来，foxp3是细胞核内的，需要破胞膜和核膜 ...

我刚开始做Treg检测，买的kit只有bufferA和bufferB但是操作步骤需要（stain buffer）FBS来洗涤，我需要另外买吗？能用PBS代替的？洗涤的主要作用是什么的？做了很多支标本了流式图是这样的，看到大家做的结果，感觉不如意，真着急啊！我要怎么改善呢？

niwanmao

ybz 发表于 2014-3-17 10:19
我刚开始做Treg检测，买的kit只有bufferA和bufferB但是操作步骤需要（stain buffer）FBS来洗涤，我需要另 ...

staining buffer用PBS问题不大，我个人觉得应该还是这个破膜剂效果的问题，可能本身核内抗原比较难做导致不稳定，或者破膜剂效果本来就差。
建议可以换一个破膜剂试试。

广州流_式

学习了。。

yuxuemeifeng

感染小鼠的脾脏淋巴细胞

以图中所圈细胞团设门

正常小鼠的脾脏细胞

niwanmao

yuxuemeifeng 发表于 2014-06-05 11:24:28

                               
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SSC用线性模式Lin更好

yuyu9073

niwanmao 发表于 2012-10-6 20:51
你难道没有用foxp3的破膜剂？那肯定更加做不出来，foxp3是细胞核内的，需要破胞膜和核膜 ...

倪老师，检测foxp3的值还是很低，那有什么办法提高吗

niwanmao

yuyu9073 发表于 2014-11-20 10:37
倪老师，检测foxp3的值还是很低，那有什么办法提高吗

可以找找看，用细胞因子（例如IL-2等）刺激Treg的增殖。PS：如果有新的问题，建议开新帖。