人外周血Th17检测

63735523 · 发表于 2012-9-24 21:50:49

倪老师，现在测Th17细胞，用的是CD3+CD8-IL-17+好还是CD4+IL-17+好？想看国外2012年文献也看不到

niwanmao · 发表于 2012-9-24 22:16:29

63735523 发表于 2012-9-24 21:50

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倪老师，现在测Th17细胞，用的是CD3+CD8-IL-17+好还是CD4+IL-17+好？想看国外2012年文献也看不到 ...

尽管刺激剂可能会导致CD4降低，但如果抗体效价好，还是能够分开的：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3005434/

两种方案都可以。

63735523 · 发表于 2012-9-24 23:48:50

恩，老师，我看现在主流还是CD3CD8吧，CD4似乎文章少一点。

63735523 · 发表于 2012-9-25 19:41:09

弱弱的问下老师，如果用CD3+CD8-IL-17+代表Th17 ，那能直接计算出Th17在CD4+细胞中的比例么？还是还要测CD4，才能计算比例？

niwanmao · 发表于 2012-9-26 06:50:22

63735523 发表于 2012-09-25 19:41:09

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弱弱的问下老师，如果用CD3+CD8-IL-17+代表Th17 ，那能直接计算出Th17在CD4+细胞中的比例么？还是还要测CD4

cd3+cd8-约等于cd3+cd4+

FacsAriaIII · 发表于 2012-9-26 14:38:26

haven-t说的很对，p+I是一种刺激，aCD3+aCD28也是对TCR的刺激，国际上都承认的。我最近看的几篇文献，有用P+I刺激的，也有aCD3+aCD28刺激的，发在nature immunology上的。不过是基础研究，用小鼠的。人血细胞应该也是同样道理。

FacsAriaIII · 发表于 2012-9-26 14:57:52

PMA是激活PKC的，而PKC的作用结果就是胞外Ca2+内流，ionomycin是钙通道载体，促进胞外Ca2+内流。
T细胞受体被激活之后，级联反应的结果也是胞外Ca2+内流。
所以aCD3+aCD28激活TCR和P+I的刺激是一致的。只不过P+ I是一种强刺激，所以时间短就够了。

niwanmao · 发表于 2012-9-26 17:49:57

FacsAriaIII 发表于 2012-9-26 14:57:52

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PMA是激活PKC的，而PKC的作用结果就是胞外Ca2+内流，ionomycin是钙通道载体，促进胞外Ca2+内流。
T细胞受体被激活之后，级联反应的结果也是胞外Ca2+内流。
所以aCD3+aC

非常感谢，能不能把文献全文传上来分享一下？

FacsAriaIII · 发表于 2012-9-26 19:43:38

TRIM28 prevents autoinflammatory T cell development in vivo.pdf (1.19 MB, 下载次数: 24)
这篇文章里，有些地方是用CD3+CD28刺激的，有些是用P+ I刺激的，而且刺激时间长达24小时，照样发nature了。
另外，http://www.ebioscience.com/media ... -flow-cytometry.pdf
这是ebioscience关于细胞内染色的说明，我摘一段：
For example, to stimulate T cells to produce IFN-γ, TNF-α, IL-2, and IL-4, a combination of PMA (a phorbol ester, protein kinase C activator) and Ionomycin (a calcium ionophore) or anti-CD3 antibodies can be used.

huzengwu · 发表于 2012-9-27 20:07:10

今天刚好做了IL-17，先用淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞，然后离子霉素，PMA的培养基1ML培养2小时，然后加入莫能霉素再培养两小时，然后标记CD4，然后再破膜标记IL-17，就可以上机检测。。。。

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