人外周血Th17检测

63735523 · 发表于 2012-10-4 20:09:34

今天刚好做了IL-17，先用淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞，然后离子霉素，PMA的培养基1ML培养2小时，然后加入莫能霉素再培养两小时，然后标记CD4，然后再破膜标记IL-17，就可以上机检测。。。。

请问结果好么？我一个做流式的老师说人CD4很难测出来，老鼠的就没问题。

63735523 · 发表于 2012-10-9 19:09:56

有没有流式检测TH17和treg的BD公司的说明书啊，现在还没买，但是需要知道具体步骤。。。谢谢各位啦。有具体步骤也可以帮忙晒晒，学习一下，越具体越好啊！

niwanmao · 发表于 2012-10-9 19:42:05

63735523 发表于 2012-10-9 19:09

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有没有流式检测TH17和treg的BD公司的说明书啊，现在还没买，但是需要知道具体步骤。。。谢谢各位啦。有具体 ...

是这份吧Mouse Th17/Treg Phenotyping Kit？
http://www.bdbiosciences.com/ext ... _enabled/560767.pdf

huzengwu · 发表于 2012-10-9 20:18:43

这个刚做过，先刺激，在标记，离子霉素，PMA两小时，再加莫能霉素两小时培养。。。。。

63735523 · 发表于 2012-10-9 22:02:53

老师，忘记说了，是人的，呵呵

rogasan · 发表于 2012-10-13 15:54:21

niwanmao 发表于 2012-9-19 21:51

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像@haven_t 战友所说，这个抗体刺激法可能是有一定的依据，不过我没有做过，不敢随便推荐。我个人还是建 ...

不同的信号而已， PMA是一种常见的丝裂原，可以使所有的细胞活化；而CD3CD28是活化TCR信号刺激细胞，仅激活T细胞而已....

niwanmao · 发表于 2012-10-13 16:24:02

rogasan 发表于 2012-10-13 15:54

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不同的信号而已， PMA是一种常见的丝裂原，可以使所有的细胞活化；而CD3CD28是活化TCR信号刺激细胞，仅 ...

是的，以前对这方面了解不深，经过讨论后才明白就是淋巴细胞的极化: http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-1867-1-1.html
@63735523 @haven_t

samly0 · 发表于 2012-10-19 15:42:24

我个人愚见认为，正常分离的PBMC不加刺激培养的话，是几乎测不到TH17的，加CD3 、CD28单抗刺激只是诱导PBMC向T细胞亚群分化，如果加上TGF-b,可以进一步分化为Treg，如果再加上IL-6、CD23、IL-1b等因子，则可以诱导分化为TH17，检测前几个小时加入PMA和离子霉素是为了让胞内的TH17因子不分泌到胞外，以便更好的检测到TH17，不知道楼主用于分离的PBMC的外周血是不是和正常PBMC不同，竟可以不刺激就表达TH17，不过我没试过不加刺激就检测TH17的，楼主不妨试试看可不可行，也跟我们分享一下结果？

laikete · 发表于 2012-10-25 13:57:38

我建议用PMA+ionmycin刺激6小时左右，要加入golgi plug/stop，CD3/28是针对T细胞的，对外周血细胞刺激可能较弱

lianronghu0207 · 发表于 2012-10-30 12:48:40

或者你可以考虑用CBA的方法做，直接用血清做。

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