求助小鼠脾淋巴细胞流式检测

vvvme

请问培养过程中细胞要换液吗？

niwanmao

vvvme 发表于 2015-4-20 16:45
请问培养过程中细胞要换液吗？

要换，但是保持CFSE浓度的稳定。

zxtzq526

咨询一下，小鼠脾脏细胞培养3-5天，如何保证细胞不死，每次养到72h，细胞都不行了，要换液还是怎样吗？

niwanmao

zxtzq526 发表于 2016-8-30 19:04
咨询一下，小鼠脾脏细胞培养3-5天，如何保证细胞不死，每次养到72h，细胞都不行了，要换液还是怎样吗？ ...

原代细胞确实很难养，要多养几天，可能都在一些细节上，需要像养孩子一样去呵护它。
这篇文章你参考一下看看：
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1415186/?page=2

zxtzq526

niwanmao 发表于 2016-8-31 08:22
原代细胞确实很难养，要多养几天，可能都在一些细节上，需要像养孩子一样去呵护它。
这篇文章你参考一下 ...

老师，你好，我的实验设计是分离脾脏淋巴细胞，淋巴节细胞以及PBMC，之后用设计的短肽刺激，然后染CD3，CD4，CD8抗体，上流式。刺激过夜是不是不够，如果刺激时间增长，有什么办法保证细胞不死呢？

niwanmao

zxtzq526 发表于 2016-8-31 10:22
老师，你好，我的实验设计是分离脾脏淋巴细胞，淋巴节细胞以及PBMC，之后用设计的短肽刺激，然后染CD3，C ...

前面那篇文章应该对你有帮助的。
原代细胞无法保证细胞不死，只能说尽量用正确的条件去刺激和培养。因为我没做过小鼠的实验，所以只能通过搜索资料给你一些建议：
If you are using 96 well plates, you can use RPMI1640 with 5 or 10 % FBS (both have worked for me), HEPES, L-Glutamine and 5 ul/lt b-ME. Mouse spleen cells are typically cultured to about 72 h - max ~96 h but the primary cells tend to start dying then. Also, some kind of stimulus (Con A/LPS) is required to activate them.