氯化铵红细胞裂解液的配制

niwanmao

shengsl2002 发表于 2017-1-9 16:12
我的条件是：人外周血，100ul全血+1ml稀释后裂解液。室温15分钟。发现效果不如BD的。 ...

应该没配好，或者这个标本的个体差异。我们之前做过不少骨髓标本，还是氯化铵裂解液好。

JennyS

niwanmao 发表于 2017-1-9 21:59
应该没配好，或者这个标本的个体差异。我们之前做过不少骨髓标本，还是氯化铵裂解液好。 ...

请问 这个配方裂解脾脏标本中的红细胞怎么样，一般裂解液用量和裂解时间是怎么判断，谢谢

niwanmao

JennyS 发表于 2017-2-21 10:06
请问 这个配方裂解脾脏标本中的红细胞怎么样，一般裂解液用量和裂解时间是怎么判断，谢谢 ...

小鼠脾脏中的红细胞也是一样，但小鼠的红细胞部分样本可能裂解效果不是很好。
人红细胞裂解一般是100ul样本＋2ml 1×裂解液。
效果好不好一看离心后红细胞沉淀，二看上机时的碎片区域。

JennyS

niwanmao 发表于 2017-2-21 10:23
小鼠脾脏中的红细胞也是一样，但小鼠的红细胞部分样本可能裂解效果不是很好。
人红细胞裂解一般是100ul样 ...

非常感谢！！！感动！

黄老邪

经过试验验证，发现老师的配方很好用。在24°环境下，3-5分钟即可很好裂解小鼠外周血红细胞。虽然有很多碎片，但是可以通过设置阈值来去除。本配方比国内产品效果好。感谢老师！

shiyue

请问倪老师，您所配置这种红细胞裂解液是否需要高温高压灭菌，此外这在裂解100ul全血时，需要常温还是置于冰上，是否要避光，裂解多长时间合适？是否需要加入PBS终止，以及这种是免洗的吗？

niwanmao

shiyue 发表于 2017-11-15 23:13
请问倪老师，您所配置这种红细胞裂解液是否需要高温高压灭菌，此外这在裂解100ul全血时，需要常温还是置于 ...

1、不能高温灭菌
2、室温裂解或冰上均可。
3、不需要避光
4、我们一般裂解10分钟。
5、不需要终止，直接离心去上清即可。

DFL

niwanmao 发表于 2017-11-16 08:17
1、不能高温灭菌
2、室温裂解或冰上均可。
3、不需要避光

请问老师，为什么不能高压呢？

niwanmao

DFL 发表于 2018-1-17 15:46
请问老师，为什么不能高压呢？

还是担心这些盐类分解，尤其是氯化铵。

花生小将99

niwanmao 发表于 2018-1-17 20:50
还是担心这些盐类分解，尤其是氯化铵。

请教一下，我做CTC，样本量比较多，有7-10ml左右，那么我裂红时的用量和时间怎么控制呢，现在用商品化的每次都裂解的不是很干净，裂解时间长会对肿瘤细胞有影响吗。谢谢！