关于LPS刺激脾脏PBMC后细胞大小变化的问题

niwanmao · 发表于 2013-4-19 12:19:39

renping_jsnj 发表于 2013-4-19 10:46

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查了一下，关于FSC-A vs FSC-H做图，是这样叙述的：
When single cells in the ﬂow cell pass through the ...

嗯，想得很细，赞一个。我确实没想得这么深入。
不过通过查看一些文章中的设门，我觉得对于正常的活细胞，还是不能分两条或多条对角线，就是一条，因为它的A和H就是呈唯一的斜率。
至于@david.yanqi 站友提供的这幅图， 3、4这两群，我个人觉得更像是那种坏死前细胞膨大的样子，所以它的斜率可能就不遵循正常细胞的那种A、H斜率，也因此，应该将3、4两群排除在外。

以上是我的一点想法，欢迎大家一起讨论。

david.yanqi · 发表于 2013-5-15 15:31:07

renping_jsnj 发表于 2013-4-19 11:29

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更正一下，不是浆细胞，是成浆细胞plsmablast。

谢谢这位师兄认真的分析和指教，很长时间没有上论坛了，呵呵，刚才看到热心的师兄你给我的细心答复，我最近做的实验，有阳性结果的偏偏就是师兄你说的第3群细胞，哎，一直都很迷茫，跟老板讲，他也不知道是为什么。。。。

david.yanqi · 发表于 2013-5-15 15:33:00

niwanmao 发表于 2013-4-19 12:19

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嗯，想得很细，赞一个。我确实没想得这么深入。
不过通过查看一些文章中的设门，我觉得对于正常的活细胞 ...

第3群细胞我能做出阳性的结果，就是在LPS刺激之后加CD40L可以下调这群细胞表面CD40分子，而正常的那群细胞1，加CD40L后它们表面CD40不下调，所以老师你说要排除掉3这群细胞，实验就进行不下去了，哎。。

ddn111 · 发表于 2013-5-16 10:13:51

1和３我认为都可以作为分析对象吧，从Ａ/H的图中也不能把3看成粘连细胞，另外，淋巴细胞刺激后母细胞化，明显有细胞增大，胞浆丰富等特征，可能就是那部分活化非常明显的细胞。

niwanmao · 发表于 2013-5-16 11:36:09

david.yanqi 发表于 2013-5-15 15:33

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第3群细胞我能做出阳性的结果，就是在LPS刺激之后加CD40L可以下调这群细胞表面CD40分子，而正常的那群细 ...

能否把原始数据文件放上来我们分析分析看？

david.yanqi · 发表于 2013-5-16 20:32:46

niwanmao 发表于 2013-5-16 11:36

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能否把原始数据文件放上来我们分析分析看？

老师，附件已经上传啦，我是用C6收集的，所以用flowjo分析要更改一下参数。谢谢啦。

david.yanqi · 发表于 2013-5-16 20:35:20

ddn111 发表于 2013-5-16 10:13

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1和３我认为都可以作为分析对象吧，从Ａ/H的图中也不能把3看成粘连细胞，另外，淋巴细胞刺激后母细胞化，明 ...

老师你好，如果真的是你这么想的话那实验就可以继续往下做了，可是问题的关键是第3群细胞我还不知道是属于那种细胞，但是肯定是活的纯B细胞，CD19全阳性，老师如果想确切知道这群细胞群，下步该怎么做呢？有什么特别的表面标记吗？谢谢老师啦。

niwanmao · 发表于 2013-5-16 21:19:41

david.yanqi 发表于 2013-5-16 20:32

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老师，附件已经上传啦，我是用C6收集的，所以用flowjo分析要更改一下参数。谢谢啦。
...

我设两个门，第一个门是FSC-A/FSC-H，第二个门是CD19+CD40+，并只圈那群主要的群体。
如果以1设门，如下图：

设门1

如果以3设门，如下图：

设门3

可以看的出来，两个群体的CD40 GEOMEAN均有所下降，只不过3稍微明显一点，但是3我还是觉得最好不要用，是否为真正的淋巴细胞你没法证实，这是其一，另外，假如CD40活化后，B淋巴细胞向母细胞或浆细胞阶段分化，其CD19应该是逐步降低的（见下图），而你这个图中明显看出3的CD19明显强于1，这不符合规律，这是其二。所以，我建议你只圈1进行分析，可以多做几次，因为这次的geomean还是有所降低的，多做几次平行试验，做个统计学比较，或许会有结果的。加油！！！

CD40刺激0－28天

david.yanqi · 发表于 2013-5-16 23:17:25

niwanmao 发表于 2013-5-16 21:19
我设两个门，第一个门是FSC-A/FSC-H，第二个门是CD19+CD40+，并只圈那群主要的群体。
如果以1设门，如下 ...

谢老师细心指点！每次都能学到新的东西！十分感谢！

木石织梦 · 发表于 2013-5-19 02:43:09

我也很疑问到底怎么从散点图判定刺激后ＰＢＭＣ，我曾经用ＣＤ３刺激，也出现和群主一样的两群，而且两群都表达ＣＤ４，很困惑到底哪群才是淋巴细胞？还是说一群是小淋巴细胞，一群是淋巴母细胞？还是因为细胞有粘连？不知道大家都是怎样判断的？

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