关于LPS刺激脾脏PBMC后细胞大小变化的问题

niwanmao

木石织梦 发表于 2013-5-19 02:43

                               
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我也很疑问到底怎么从散点图判定刺激后ＰＢＭＣ，我曾经用ＣＤ３刺激，也出现和群主一样的两群，而且两群都 ...

象@david.yanqi  这里那堆在FSC-A/FSC-H上比较大的第3群那样吗？这类细胞我是觉得虽然是阳性，但是这个阳性有点可疑，而且细胞性质没法明确，还是尽可能别包括进去。
你能否把你的数据也传一个上来看看？一般T淋巴细胞母细胞化可能性很小吧。

木石织梦

niwanmao 发表于 2013-5-19 10:56

                               
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象@david.yanqi  这里那堆在FSC-A/FSC-H上比较大的第3群那样吗？这类细胞我是觉得虽然是阳性，但是这个阳 ...

是的，和楼主的前向侧向图一模一样。而且，我培养几天后，实验组前向侧向大的那群明显增大，而阴性对照组的这群却凋到基本没有了。但是中间那群前向比较小的，和前向大的这群刚好相反。还有一个疑问是，这两群CD4+居然都差不多。

niwanmao

木石织梦 发表于 2013-5-20 08:59

                               
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是的，和楼主的前向侧向图一模一样。而且，我培养几天后，实验组前向侧向大的那群明显增大，而阴性对照组 ...

FSC-A/FSC-H散点图呢？

mybiosciences

要不要加个7-AAD去除一下死细胞呢？

niwanmao

mybiosciences 发表于 2013-5-20 11:44

                               
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要不要加个7-AAD去除一下死细胞呢？

确实，其实死细胞对实验结果影响挺大的。 @木石织梦    @david.yanqi      

david.yanqi

niwanmao 发表于 2013-5-20 12:36

                               
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确实，其实死细胞对实验结果影响挺大的。 @木石织梦    @david.yanqi

好的，老师，下次我做一个，如果有差异我把图再放上来大家讨论一下。

木石织梦

niwanmao 发表于 2013-5-20 10:51

                               
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FSC-A/FSC-H散点图呢？

这个，因为之前做的是CFSE看增殖，CFSE和PE干扰太大，需要补偿。我的破解版flowjo只补偿FCS-H。所以当初收细胞的时候，让老师只给我收FSC-H的。所以，悲催了……

毛豆24821

大家好，最近我们也在做lps刺激小鼠spleen的B/T细胞上的CD70的实验，一直刺激不出来，我们用的是新鲜spleen细胞加上1ug/ml LPS的1640+10%FBS，初始细胞密度是1 million/ml，刺激三天，中途不换液，细胞几乎死掉三分之二。
是否初始细胞密度不对？或者别的原因。LPS 用的是Sigma L-8274 。
求指点，万分感谢

niwanmao

毛豆24821 发表于 2018-7-30 11:22
大家好，最近我们也在做lps刺激小鼠spleen的B/T细胞上的CD70的实验，一直刺激不出来，我们用的是新鲜spleen ...

中途你有没有看到培养基颜色？如果增殖太快，我建议还是换一下液，用同样浓度的培养基换一下。

毛豆24821

niwanmao 发表于 2018-7-30 21:38
中途你有没有看到培养基颜色？如果增殖太快，我建议还是换一下液，用同样浓度的培养基换一下。 ...

培养基颜色还行，细胞有一点点抱团，死了很多，没有太黄。初始15 million，三天后5 million，这样是不太正常的？