CFSE检测淋巴细胞增殖的玄妙之处（4个关键）

niwanmao

王娟 发表于 2015-6-30 20:33
倪老师，我最近要做CFSE染色，看了您说的这四点之后，我有个疑问，到底稀释CFSE的PBS中要不要加0.1%BSA呢？ ...

游离氨基酸会结合CFSE，而不是蛋白质：）

深渊色

最近正准备做CFSE染色，受益匪浅，太感谢啦

sunny2829

好东西，学习了。最近正打算做~~~

小憨

niwanmao 发表于 2015-6-30 20:42
游离氨基酸会结合CFSE，而不是蛋白质：）

我查了一下相关资料，CFSE可以跟游离的氨基起反应而不是氨基酸，当然氨基酸肯定是有游离氨基的，蛋白质也是有的，甚至百度百科直接就是说结合的是蛋白质。所以我觉得在染色的时候就用无血清无BSA的PBS，不能用完全培养基或者无血清的培养基；否则就需要加大CFSE的浓度。

长风万里无云

感谢分享，最近正要做这个实验。

zhangyy

感谢分享！

咸鱼小姐姐

流式小白，受益匪浅

leleyou

倪老师您好，我最近也在做CFSE，但是结果不是很好，请问CFSE加入含有0.1%的BSA的PBS，BSA能用FBS替代吗？浓度是多少呢？我看您发的这篇文献他是5%的FCS，是需要这么高吗？

niwanmao

leleyou 发表于 2019-8-29 08:25
倪老师您好，我最近也在做CFSE，但是结果不是很好，请问CFSE加入含有0.1%的BSA的PBS，BSA能用FBS替代吗？浓 ...

Nature Protocol里面的意思是如果细胞密度<10*10E6/ml，属于密度较低的，为了避免CFSE把细胞都毒死了，所以可加入一点FCS，让细胞死得少一些，但会降低CFSE染色效果，相当于在两者之间起到一个平衡作用。

飞翔

看了文献，文献中Much of the CFSE at this point is not stably incorporated within the cells and is lost from the cells during the next 24–48 h. As a result, the initial fluorescence intensity is extremely high and can bleed significantly into other flow cytometry detectors (particularly those set for detection of fluorescence at wavelengths close to CFSE, i.e., the PE detector). This should be taken into consideration if cells are to be analyzed or sorted by a flow cytometer within the first few hours after staining, which is not recommended. This problem can be reduced by decreasing the concentration of CFSE during labeling, but this will reduce the
number of detectable cell divisions. 提到刚染色后大部分CFSE不能稳定地并入细胞内，并在下一次细胞内丢失24–48小时。因此，CFSE初始荧光强度非常高。如果细胞要在染色后的最初几小时内通过流式细胞仪进行分析或分选。那CFSE染色的浓度是不是的在染色后24h上机检测，看看CFSE强度来确认？不太明白这个